بررسی بیان پروتئین gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم در e. coli

سابقه و هدف: کریپتوسپوریدیوم یک انگل تک یاخته ای دارای اهمیت در پزشکی و دامپزشکی است که سبب اسهال و استفراغ در طیف وسیعی از مهره داران می شود. برخی از آنتی ژن های سطحی انگل از جمله gp40/15 در اتصال و تهاجم به سلول میزبان و تحریک سیستم ایمنی نقش مهمی بر عهده دارند. با کلون و بیان نمودن این آنتی ژن ها امکان دسترسی به پروتئین های نوترکیب انگل فراهم می شود. هدف این مطالعه بیان ژن gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم در باکتری اشرشیاکلی است.مواد و روش ها: توالی ژن gp40/15 کریپتوسپوریدیوم پارووم از بانک ژن به شماره af155624 استخراج و به صورت صناعی در pet28a+ کلون و تهیه گردید. جهت تایید از روش های colonypcr و هضم آنزیمی به وسیله آنزیم های محدودکننده bamhi وxhoi استفاده شد. پلاسمید نوترکیب به داخل باکتری اشرشیاکلی منتقل شده و بیان پروتئین با استفاده از sdspage، وسترن بلات و الایزا با استفاده از سرم حاوی آنتی بادی بر ضد انگل کریپتوسپوریدیوم پارووم تایید شد و سپس با ستون کروماتوگرافی تخلیص گردید.نتایج: نتایج نشان داد که ژن gp40/15 درپلاسمید pet28a+ کلون شده است و نتایج colonypcr و هضم آنزیمی پلاسمید pet28a+ حاوی ژن gp40/15، قطعه 921bp را نشان داد. بیان pegp40/15 در باکتری اشرشیاکلی با استفاده از روش های sdspage، وسترن بلات والایزا تایید شد و باندی در حدود 43 کیلودالتون را نشان داد.نتیجه گیری: ژن gp40/15 کلون شده در پلاسمید بیانیpet28a+ به طور موفقیت آمیزی در باکتری اشرشیا کلی بیان شده و پروتئین نوترکیب gp40/15 در آن تولید شده است. لذا، می توان از این پروتئین در مطالعات بعدی جهت ساخت واکسن های پروتئینی نوترکیب و طراحی کیت تشخیصی استفاده نمود.

Expression of the protein gp40/15 Cryptosporidium parvum in E. coli

Background: Cryptosporidium is a parasitic protozoa of medical and veterinary importance that causes gastroenteritis in a variety of vertebrate hosts. Some of the parasite surface antigens such as gp40/15 play an important role in attaching and invasion to host cell and stimulating the immune system. The possible access to recombinant proteins of the parasite can be provided by cloning and expression of these antigens. The aim of this study was to study the gene expression of gp40/15 Cryptosporidium parvum in Escherichia coli (E. coli).Materials and Methods: The sequence of gene gp40/15 for Cryptosporidium parvum was extracted from GenBank (No.AF155624) and was synthetically cloned in PET28a+. The recombinant plasmid was confirmed by the colony PCR and the BamHI and XhoI restriction enzymes. The recombinant plasmid was transferred into E. coli and the protein expression was verified using SDSPAGE, Western blot and ELISA which was then purified by column chromatography.Results: The results showed that the gene gp40/15 was cloned into PET28a+ plasmid. The confirmation of isolated gene cloned in PET28a+ was done by colony PCR, restriction enzymes which showed a 921bp band. The PET28agp40/15 plasmid expressed in E. coli showed a 43 kDa band which was confirmed using the SDSPAGE, Western blotting and ELISA.Conclusion: The results showed that the gene gp40/15 successfully cloned into the expression plasmid PET28a+ expressed in E.coli and recombinant protein gp40/15 is produced in it. Therefore, the recombinant protein can be used to design recombinant vaccines and diagnostic kits in further.