رنگ آمیزی معکوس: روشی موثر برای تخلیص پروتئین hiv-1 nef در سیستم بیان پروکاریوتی

سابقه و هدف: پروتئین nef، یکی از پروتئین های تنظیمی ویروس hiv، دارای اپی توپ های حفاظت شده متعددی است که در افراد آلوده به ایدز پاسخ های ایمنی قدرتمندی علیه آن ها مشاهده شده است. بنابراین، پروتئین nef کاندید مناسبی برای تولید واکسن می باشد. هدف این پژوهش کلونینگ و بیان پروتئین nef در سیستم بیان پروکاریوتی و تخلیص آن به روش رنگ آمیزی معکوس می باشد.مواد و روش ها: توالی کدکننده پروتئین nef از وکتور puc19 توسط pcr تکثیر شد و الحاق آن به داخل وکتور بیانی pgex6p2 انجام شد. این سازه طی فرایند ترانسفورماسیون به سویه باکتری e.coli bl21 منتقل شده و القای بیان پروتئین با استفاده از آنتی رپرسور iptg صورت گرفت. تایید بیان پروتئین با استفاده از آنالیز sdspage و وسترن بلات توسط آنتی بادی ضد nef بررسی گردید. تخلیص پروتئین با استفاده از تکنیک رنگ آمیزی معکوس از روی ژل انجام شد.نتایج: نتایج آنالیز pcr و هضم آنزیمی وجود باند واضح حدود 648 جفت باز را روی ژل آگاروز تایید کرد که نشان گر کلونینگ صحیح ژن nef در وکتور بیان پروکاریوتی pgex6p2 می باشد. هم چنین، وجود باند حدود 50 کیلودالتون نشان گر بیان پروتئین nef توسط آنتی بادی منوکلونال ضد nef در آنالیز وسترن بلات تایید شد. در نهایت، باند خالص شده پروتئین توسط تکنیک رنگ آمیزی معکوس به دست آورده شد.نتیجه گیری: پروتئین نوترکیب nef بیان شده در میزبان e. coli با بازده مناسب توسط روش رنگ آمیزی معکوس تخلیص شد. پروتئین nef در آینده به عنوان یک آنتی ژن برای طراحی واکسن پروتئینی در مقابل عفونت ویروس hiv استفاده خواهد شد.