تاثیر فاکتور رشد شبه‌انسولین -1 بر تکثیر سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی بز در شرایط آزمایشگاه

سابقه و هدف: هدف از انجام مطالعه حاضر ارزیابی تاثیر فاکتور رشد شبه‌انسولینی -1 بر تکثیر سلول‌های اسپرماتوگونی بز در محیط آزمایشگاه بود.مواد و روش‌ها: بیضه بز نابالغ از کشتارگاه گرفته و جداسازی سلول‌های اسپرماتوگونی به روش هضم دومرحله‌ای انجام شد. سلول‌های اسپرماتوگونی در محیط کشت dmem حاوی 5 درصد سرم گوساله جنینی و 1 درصد آنتی‌بیوتیک (پنی‌سیلین - استرپتومایسین) کشت داده شد و به گروه شاهد و تیمارهای 1، 2 و 3 به‌ترتیب مقادیر 0، 10، 40 و 100 نانوگرم بر میلی‌لیتر فاکتور رشد شبه‌انسولین-1 اضافه گردید. داده‌ها با آزمون آنالیز واریانس یک‌طرفه و آزمون تکمیلی توکی در سطح 5 درصد آنالیز شدند. جهت شناسایی سلول‌های اسپرماتوگونی از رنگ‌آمیزی ایمونوهیستوشیمی علیه آنتی‌ژن pgp9.5 و همچنین آزمون pcr- rtنشانگرهای thy-1، vasa، uchl-1(pgp9.5)،  plzf و oct-4 استفاده شد.نتایج: تعداد کلونی‌های سلول‌های اسپرماتوگونی در تیمار 3 در مقایسه با گروه شاهد و دیگر تیمارها در تمامی روزهای ارزیابی (4، 7 و 10)، به‌طور معنی‌داری بیشتر بود. مساحت کلونی‌های تیمار 1 در روزهای 7 و 10 کشت، اختلاف معنی‌داری را با تیمار 2 و گروه شاهد نشان داد. همچنین مساحت کلونی‌های تیمار 3 در روزهای 4، 7 و 10 پس از کشت نسبت به گروه شاهد، تیمار 1 و تیمار 2 به‌طور معنی‌داری بیشتر بود. سلول‌های جداشده تمامی نشانگرهای سطحی، مربوط به سلول‌های بنیادی را بیان کردند.نتیجه‌گیری: برای کشت کوتاه‌مدت سلول‌های بنیادی اسپرماتوگونی بز در شرایط آزمایشگاه، افزودن فاکتور رشد شبه‌انسولین-1 با دوز 100 نانوگرم بر میلی‌لیتر پیشنهاد می‌شود.

the effect of insulin-like growth factor-1 on the proliferation of goat spermatogonial stem cells (sscs) in vitro

background: this study aimed to the effect of insulin-like growth factor-1 on the proliferation of goat spermatogonial stem cells (sscs) in vitro.materials and methods: the testicles of immature goats were obtained from slaughterhouse. isolation of spermatogonial cells was performed by two-step digestion. the isolated cells were cultured in 4 different groups: 3 groups by adding different doses of igf-1 (10, 40 and 100 ng/ml) to the basic medium (dmem containing 5% fetal bovine serum and 1% antibiotic) and the control group (without igf-1). data were analyzed by one-way anova and tukey test at 5% level. presence of sscs at the end of culture was determined by reverse transcription polymerase chain reaction (rt-pcr) for several important spermatogonial markers (pgp9.5, thy-1, plzf, oct4 and vasa) and immunohistochemical staining against pgp9.5 antigen.results: in this study, the number of spermatogonial cell colonies in treatment 3 was significantly higher than the control and other treatment groups on days 4, 7, and 10 of culture (p<0.05). also, the surface area of g10 colonies on days 7 and 10 of culture was significantly different (p<0.05). the surface area of g100 on days 4, 7, and 10 after culture was significantly higher than control, g10 and g40 (p<0.05). the isolated cells expressed all surface markers related to stem cells.conclusion: according to this results, the addition of 100 ng/ml igf-1 to culture medium for promoting colonization of goat spermatogonial stem cells is recommended.