ارزیابی اثرات محافظت کنندگی در برابر انجماد سرم جنین گاو و ترهالوز بر میزان زنده‌مانی سلول های بنیادی اسپرماتوگونی بز

سابقه و هدف: سلول های بنیادی اسپرماتوگونی (sscs: spermatogonial stem cells)، اساس اسپرماتوژنز هستند؛ زیرا ظرفیت خودنوسازی و تمایز به اسپرماتوزوآ را دارند. انجماد، متداول ترین روش حفظ طولانی‌مدت sscs است. هدف از مطالعه حاضر، بررسی اثرات محافظت کنندگی در برابر انجماد سرم جنین گاو (fbs: fetal bovine serum) و ترهالوز بر sscs بز بود. مواد و روش ها: sscs از بیضه بز نابالغ توسط هضم آنزیمی و حذف تمایزی جداسازی شدند. سلول ها به 9 گروه تقسیم شدند. گروه کنترل شامل sscs بدون عوامل محافظت کننده انجماد بود. در گروه های تیمار 1، 2، 3 و 4؛ غلظت 10 درصد fbs و غلظت های مختلف ترهالوز (0، 50، 100 و 200 میلی مول) و در گروه های تیمار 5، 6، 7 و 8؛ غلظت 20 درصد fbs و غلظت های مختلف ترهالوز (0، 50، 100 و 200 میلی مول) به ترتیب استفاده شد. میزان زنده‌مانی سلول ها بلافاصله پس از جداسازی، افزودن مواد محافظ انجماد و یخ گشایی ارزیابی شد. ماهیت سلول‌ها توسط رنگ‌آمیزی ایمنوسیتوشیمی علیه آنتی‌ژن pgp9.5 تایید شد. داده‌ها توسط آزمون آنالیز واریانس یک طرفه تحلیل گردیدند. نتایج: میزان زنده‌مانی sscs در تیمارهای مختلف، متعاقب افزودن fbs و ترهالوز بلافاصله پس از جداسازی، مشابه سلول های زنده بود. علاوه‌بر این، بیشترین میزان زنده‌مانی sscs پس از یخ گشایی در محیط انجماد حاوی 10 درصد fbs و 200 میلی مول ترهالوز مشاهده شد (0/05>p).نتیجه گیری: نتایج نشان داد که انجماد در fbs 10 درصد توام با 200 میلی مول ترهالوز به عنوان روش موثر برای حفاظت از انجماد sscs بز عمل می کند.

Assessment of the cryoprotective effects of fetal bovine serum (FBS) and trehalose on the viability rate of caprine spermatogonial stem cells (SSCs)

Background: Spermatogonial stem cells (SSCs) are the foundation of spermatogenesis, because they have the capacity of selfrenewal, and differentiation into spermatozoa. Freezing is the most common longterm preservation approach for SSCs. The present study aimed to investigate the cryoprotective impacts of FBS (Fetal Bovine Serum) and trehalose on caprine SSCs.Materials and Methods: SSCs were isolated from prepubertal goat testis by enzymatic digestion and differential plating. Cells were divided into 9 groups. The control group included SSCs without cryoprotective agents. In the treatment groups 1, 2, 3 and 4, concentration of 10% FBS, and various concentrations of trehalose (0, 50, 100 and 200 mM), and in the treatment groups 5, 6, 7, and 8, concentration of 20% FBS and various concentrations of trehalose (0, 50, 100 and 200 mM) were used respectively. The viability rate of the cells was assessed immediately after isolation, following addition of cryoprotectant agents and after thawing. Identification of cells was confirmed by immunocytochemical staining against PGP9.5 antigen. Data were analyzed using oneway ANOVA test.Results: The viability rate of SSCs in various treatments following addition of FBS and trehalose were similar to viable cells immediately after isolation. Furthermore, higher viability rates of SSCs after thawing were observed in freezing medium containing 10% FBS and 200 mM trehalose (P<0.05).Conclusion: The results revealed that freezing in 10% FBS with 200 mM trehalose acts as efficient method for the cryopreservation of caprine SSCs.