بررسی تاثیر انجماد سریع بر بیان ژن‌های Spag5 و Spag9 اسپرم انسانی

سابقه و هدف: آنتی‌ژن‌های اختصاصی اسپرم (spag)، نقش مهمی در بروز سرطان‌های مختلف، مانند سرطان سینه، ریه، کبد و مثانه دارند. همچنین spagها اهمیت بالایی در عملکردهای اسپرم، همچون تحرک دارند. با این‌حال به‌نظر می‌رسد انجماد اسپرم به‌عنوان یکی از روش‌های کمک‌باروری می‌تواند بر بیان این ژن‌ها تاثیرگذار باشد. هدف مطالعه حاضر، ارزیابی اثر انجماد، بر بیان spagهای 5 و 9 اسپرم انسانی می‌باشد.مواد و روش‌ها: در مطالعه تجربی حاضر، 12 نمونه نرمال از نظر پارامترهای طبیعی اسپرم، از منی مردان مراجعه‌کننده به پژوهشگاه رویان جمع‌آوری گردید و با روش سانتریفیوژ گرادیان، غلظت اسپرم‌های دارای تحرک موثر بالا جداسازی شد. نمونه‌ها به دو گروه غیرانجمادی (گروه کنترل) و گروه انجمادی تقسیم شدند. پس از انجماد به روش سریع و نگهداری برای سه روز در تانک نیتروژن، نمونه‌ها زیر شیر آب سرد ذوب شدند و به مدت دو ساعت در انکوباتور دارای co2 قرار گرفتند. استخراج rna در هر دو گروه با استفاده از ترایزول صورت گرفت و ارزیابی ژن‌های spag9 و spag5 با روش real-time pcr انجام شد.نتایج: براساس تجزیه و تحلیل آماری، بیان spag5 در گروه انجمادی نسبت به گروه کنترل کاهش معنی‌داری داشت (p≤0. 05)؛ در مقابل تفاوت معنی‌داری در بیان ژن spag9 بین گروه کنترل و انجمادی مشاهده نشد.نتیجه‌گیری: با در نظر گرفتن شوک حاصل از سرما در آینده سلول، کاهش بیان معنی‌دار spag5 در گروه انجمادی می‌تواند بیانگر بروز اثرات احتمالی آن در جنین حاصل باشد.

The effect of rapid freezing on the expression of SPAG5 and SPAG9 in human spermatozoa

Background: Sperm associated antigens (SPAGs) play an important role in the incidence of various cancers including breast, lung, liver, and bladder. SPAGs are also important in sperm functions, such as motility. However, it seems that sperm cryopreservation as one of the assisted reproductive techniques (ART), can affect the expression of these genes. This study aimed to evaluate the effect of freezing on the expression of human SPAG 5 and 9 in human spermatozoa.Materials and Methods: In the present experimental study, twelve semen samples in terms of normozoospermic parameters were collected from individuals referred to the Royan Institute, and progressive motile sperms were isolated by density gradient centrifugation (DGC). Each sample was divided into two, nonfrozen (control) and frozen groups. After rapid freezing and threeday storage in liquid nitrogen, samples were thawed in tap water and incubated for 2 hours of recoverytime in a CO2 incubator. RNA extraction in both groups was performed using TRIzol; and SPAG5 and 9 were evaluated by Realtime PCR technique.Results: Based on statistical analysis, the expression of SPAG5 decreased significantly in the frozen group compared to the control group (P le;0.05); In contrast, there was no significant difference in the expression of SPAG9 between the control and frozen groups.Conclusion: Considering the cold shock in the future of cell, a significant reduction in SPAG5 expression in the frozen group may indicate probable influences in the derived fetus.