بهینه سازی شرایط استخراج ملامین و تعیین میزان آن در تخم مرغ به روش کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا

وجود ملامین در مواد غذایی یکی از موضوعات حائز اهمیت در زمینه ایمنی مواد غذایی و سلامت مصرف کنندگان می باشد. استخراج اولین قدم در راستای تعیین میزان ملامین در مواد غذایی است. لذا در پژوهش حاضر شرایط استخراج ملامین از تخم مرغ با استفاده از روش شناسی سطح پاسخ بر اساس طرح مرکب مرکزی بهینه گردید. درصد آب در فاز استخراج کننده حاوی آب/استونیتریل، حجم فاز استخراج کننده، زمان استخراج، ph فاز استخراج کننده و غلظت هیدروکلریک اسید در فاز استخراج کننده به عنوان متغیرهای مورد مطالعه برای بهینه سازی استخراج ملامین در نظر گرفته شدند. در نهایت مقدار ملامین موجود در چهار نشان تجاری تخم مرغ با استفاده از دستگاه کروماتوگرافی مایع با کارآیی بالا (hplc) به روش افزایش استاندارد اندازه گیری شد. شرایط بهینه استخراج به صورت 39.28 درصد آب در فاز استخراج کننده، 5.06 میلی لیتر حجم حلال استخراج کننده، 12.48 دقیقه زمان استخراج، ph برابر 5.04 و غلظت اسید برابر 0.73 مولار به دست آمد. مقدار ملامین در نمونه های تخم مرغ مورد مطالعه در محدوده 019-0/45 میلی گرم بر کیلوگرم به دست آمد. با توجه به میزان مجاز ملامین که توسط اتحادیه اروپا و سازمان غذا و داروی آمریکا تعیین شده است می توان نتیجه گیری نمود که مقدار ملامین نمونه های مورد مطالعه در محدوده مجاز استاندارد اتحادیه اروپا قرار دارد و تنها در دو نمونه مقدار آن بیش از استاندارد آمریکا است.

Optimization of extraction conditions and determination of melamine in egg using highperformance liquid chromatography

The presence of melamine in foods is one of the important issues in terms of food safety and consumer health. Extraction is the first step in determining the amount of melamine in foods. Therefore, in the current study, melamine extraction from egg was optimized using response surface methodology based on the central composite design. The percentage of water used in the extraction phase containing water/acetonitrile, extraction phase volume, extraction time, pH of extraction phase, and hydrochloric acid concentration in the extraction phase were considered as the studied variables for optimizing extraction conditions. Finally, the amount of melamine present in four brands of egg was measured by highperformance liquid chromatography (HPLC) using internal standard method. Optimum extraction conditions were obtained in the form of 39.28% water in the extraction phase, 5.06 mL extraction solvent volume, 12.48 min extraction time, pH 5.04 and acid concentration of 0.73 M. The amount of melamine in the egg samples was in the range of 0.190.45 mg/kg. Regarding the amount of melamine authorized by the EU and the US Food and Drug Administration, it can be concluded that the melamine content of the samples is within the limits of the EU standard and only in two samples was more of the USFDA standard.