مقایسه کارآیی اتیدیوم مونوآزید (ema) و پروپیدیوم مونوآزید (pma)در شمارش سلول های زنده پاتوژن به روش pcr زمان واقعی در سیستم های مدل غذایی

تکنیک pcr علاوه بر dna سلول های زنده، سلول های مرده را نیز شمارش می کند و این امر قضاوت در مورد کیفیت میکربی نمونه های غذایی را دچار مشکل می نماید. هدف این مطالعه مقایسه تکنیک های اتیدیوم مونوآزیدqpcr و پروپیدیوم مونوآزیدqpcr در شمارش سلول های پاتوژن (اشرشیاکلی، استافیلوکوکوس ارئوس، انتروکوکوس فیکالیس و لیستریامونوسیتوجنس) در نمونه های شیر کم چرب و پرچرب، پنیر لاکتیکی (کم چرب) و پنیر پروسس (پرچرب) بود. نسبت های مختلف از پاتوژن های زنده و کشته شده توسط حرارت به نمونه های غذایی تلقیح گردید. پس از جداسازی پلت باکتریایی و تیمار باema و pma ، pcr کمی انجام شد. آنالیز واریانس یک طرفه و آزمون توکی جهت تحلیل داده ها بکار رفت. در نمونه شیر کم چرب، طی تیمار با ema، کاهش 18، 20، 23 و 30 درصدی در شمارش اشرشیاکلی، استافیلوکوکوس اورئوس، انتروکوکوس فکالیس و لیستریامونوسیتوجنس در مقایسه با کشت معمولی مشاهده شد. همچنین در تیمار با pma در همین نمونه کاهش 6، 3، 8 و 12 درصدی در شمارش اشرشیاکلی، استافیلوکوکوس اورئوس، انتروکوکوس فکالیس و لیستریامونوسیتوجنس به دست آمد. در نمونه های غذایی پرچرب مانند پنیر پروسس در تیمار با ema، کاهش 20، 27، 30 و 25 درصدی و در تیمار با pma کاهش 9، 6، 10 و 5 درصدی در تعداد، به ترتیب، اشرشیاکلی، استافیلوکوکوس اورئوس، انتروکوکوس فکالیس و لیستریامونوسیتوجنس مشاهده گردید. درجه بازداری ema و pma از تولید سیگنال در باکتری های مختلف متفاوت بود و درصد چربی نمونه ها تاثیر معناداری (0.05

Comparing Efficacy of Ethidium Monoazide (EMA) and Propidium Monoazide (PMA) qPCR in Live Pathogen Quantifying by RealTime PCR in Food Model Systems

PCR quantifies dead cells beside live cells and this makes the judgment of microbial quality of food samples complicated. The objective of this study was comparing the efficacy of ethidium monoazideqPCR and propidium monoazideqPCR in quantifying live pathogen cells (E.coli, Staphylococcus aureus, Enterococcus fecalis and Listeria monocyogenes) by real time PCR, in lowfat and highfat milk, lactic cheese (lowfat) and processed cheese (highfat). Different proportions of live and heat killed pathogen cells were inoculated into food samples. After separating bacterial pellets, EMA and PMA treatments qPCR was conducted. Oneway ANOVA followed by Turkey’s Multiple Comparison tests were applied to analyze the data. In lowfat milk, EMA treatment resulted in 18, 20, 23 and 30% decrease in cell count of E.coli, S.aureus, E. fecalis and L. monocyogenes, respectively, compared to conventional culturing. Also, following treatment by PMA, 6, 3, 8 and 12% decrease in cell count was obtained for E.coli, S.aureus, E. fecalis and L. monocyogenes, respectively, compared to conventional culturing. In highfat samples as processed cheese, a reduction of 20, 27, 30 and 25% in EMA treatment and 9, 6, 5 and 10% in PMA treatment was observed in cell count of E.coli, S.aureus, E. fecalis and L. monocyogenes , respectively. The inhibitory potential of EMA and PMA against signal emission was variable in different bacterial species and the fat content of the samples exerted no significant effect (p>0.05) on PMA and EMA functionality.