مطالعه چهار روش مختلف استخراج پروتئین از موکوس پوست گاو ماهی میمونی دریای خزر (neogobius fluviatilis pallas, 1814) به ‌منظور غربالگری از طریق سنجش زیستی

استخراج پروتئین از موکوس پوست ماهی‌ها با هدف غربالگری مبتنی بر سنجش زیستی بسیار چالشی و متغیر است. در این مطالعه، چهار روش مختلف استخراج و تغلیظ پروتئین شامل استخراج فاز جامد (spe)، استون، تری کلرو استیک اسید-استون و متانول با هدف بررسی کارایی آنها در الترافیلتراسیون و گرفتن قله‌‌های (peaks) مناسب در کروماتوگرافی مایع با عملکرد بالا (hplc) جهت سنجش فعالیت زیستی مورد مقایسه قرار گرفتند. داده‌های ارائه شده نشان می‌دهد که روش استخراج فاز جامد نسبت به سه روش مورد آزمایش دیگر بر حسب کمیت (میزان پروتئین تام) و کیفیت (پروفایل پروتئینی مشاهده شده در sds – page) پروتئین‌های موکوس پوست گاو ماهی، برتری دارد. از سوی دیگر، به علت ماهیت هیدروفوبی موکوس اپیدرمی، سه روش استخراج با استون، متانول و تری کلرو استیک اسید/استون منجر به تجمع غیر قابل برگشت پروتئین‌ها گردید که الترافیلتراسیون، hplc و به تبع آن سنجش فعالیت زیستی را غیر ممکن می‌سازد. در این مطالعه، بالاترین میزان پروتئین (4.676 میکروگرم بر میلی‌لیتر) (0.01>p) و بهترین پروفایل پروتئینی (13باند) مربوط به استخراج فاز جامد بود. همچنین این روش به ‌طور هم‌زمان منجر به استخراج، تغلیظ و تخلیص (پاکسازی) اولیه نمونه‌ها و در نتیجه، افزایش کارایی الترافیلتراسیون و hplc می‌گردد. بنابراین، برای جداسازی پروتئین‌ها و پپتیدهای فعال از نمونه‌های پیچیده زیستی مختلف (موکوس پوست ماهیان)، مناسب است. 

study of four protein-extraction methods of the caspian monkey goby (neogobius fluviatilis pallasi pallas, 1814) epidermal mucus for bioassay-guided screening

fish epidermal mucus protein extraction for bioassay-guided screening is challenging and variable. in this study, four different protein extraction methods, including acetone, trichloroacetic acid (tca)-acetone, methanol, and solid-phase extraction (spe), were investigated to study their efficiency in ultrafiltration and to obtain the appropriate peaks in hplc to measure biological activities. the presented data shows that the solid phase extraction method is better than the other three tested methods in quantity (total protein yield) and quality (protein profile observed in sds-page) of proteins and peptides from the epidermal mucus of caspian monkey goby. on the other hand, due to the epidermal mucus hydrophobic nature, all three extraction methods including acetone, (tca)-acetone and methanol led to the irreversible proteins aggregation, makes ultrafiltration, hplc, and consequently bioactivity screening impossible. in this study, the highest amount of protein (4.676 μg/ml) (p<0.01) and the best protein profile (13 bands) were related to solid phase extraction. also, this method simultaneously leads to the extraction, concentration, and initial purification of the samples and therefore improves the efficiency ultrafiltration and hplc. thus, we introduce this method for the isolation of active proteins and peptides from various complex biological samples, including fish epidermal mucus.