کلون کردن اپیتوپ‌های خطی آنتی ژن p14-3-3 در وکتور pegfp-n1 به عنوان یک مدل واکسن dnaجهت القا ایمنی علیه کیست هیداتیک و بررسی بیان آن در رده سلولی cho

زمینه و هدف: کیست هیداتیک در اثر آلودگی با لارو انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس ایجاد می­شود. در مرحله لاروی این انگل آنتی­ژن­های متعددی تولید می­شود که یکی از این آنتی­ژن­ها، آنتی­ژنی از خانواده پروتئین­های p14-3-3 می­باشد و واکسن نوترکیب آن ایمنی‌زایی قابل توجهی را در موش القا کرده است. با توجه به ایمونوژن­تر بودن نواحی اپی­توپی آنتی­ژن­ها و تولید پاسخ ایمنی  th1 مطلوب هدف از این مطالعه کلون کردن اپی­توپ­های خطی این آنتی­ژن شناسایی شده در وکتور n1–pegfp بود که در ساخت یک مدل  dna واکسن موثر بود.روش بررسی: در این مطالعه تجربی پس از شناسایی اپی­توپ­های خطی آنتی­ژن p14-3-3 توسط نرم­افزارهای بیوانفورماتیکی، توالی             کد­کننده آن به صورت سنتتیک فراهم شد، پس از تکثیر با واکنش pcr  و هضم توسط آنزیم محدود کننده  ‌xhoi، در وکتور            n1 – pegfp تخلیص شده با روش سمبروک تغییر یافته که همراه  با استفاده از cacl2 وpeg6000  می­باشد کلون شده و کلونی­های مثبت حاوی وکتور نوترکیب ابتدا به روش colony pcr و سپس توالی‌یابی تایید شد. برای بررسی بیان در سلول­های یوکاریوت با روش الکتروپوریشن به رده سلولیcho  منتقل شدند.یافته­ها: توالی کد کننده اپی­توپ­های خطی آنتی­ژن p14-3-3 انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس پس از شناسایی، سنتز و تکثیر در وکتورpegfp-n1 که تخلیص آن  با روش جدید به خوبی با حداکثر غلظت پلاسمید و حداقل مقدار rna همراه است، کلون شده و پس از تایید کلونینگ، بیان آن نیز در رده سلولی cho به عنوان نمونه­ای از سلول­های یوکاریوت به صورت موفقیت­آمیز با میکروسکوپ فلورسنت انجام شد و استفاده از سازه حاصل در قالب واکسن ژنی برای  بررسی پاسخ ایمنی در مدل­­های موشی در مراحل بعدی پژوهش انجام خواهد شد.نتیجه­گیری: نتایج حاصل از توالی یابی، تایید کننده کلونینگ صحیح توالی کد کننده اپی­توپ­­­­­های خطی آنتی­ژن ζ p14-3-3 انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pegfp-n1  بوده و نتایج حاصل از میکروسکوپ فلورسانس نشانگر بیان موفقیت­آمیز پروتئین نوترکیب در سلول یوکاریوتیcho می­باشد.واژه‌های کلیدی: اکینوکوکوس گرانولوزوس، کلونینگ، dna واکسن،p14-3-3خش وارد کنید