ساخت یک سازه بهینه شده لنتی ویروسی نوترکیب حاوی ژن pdx-1 برای انتقال ژن به سلول‌های بنیادی در راستای ژن درمانی دیابت نوع 1

زمینه و هدف: امروزه بسیاری از پروتکل‌های ژن درمانی با حامل های لنتی ویروسی انجام می شود. یکی از مهم‌ترین فاکتورهایی که در تکوین پانکراس و رونویسی ژن انسولین نقش دارد فاکتور رونویسی pancreatic & duodenal homeobox 1 (pdx-1) است. هدف از این مطالعه بهینه‌سازی سازه لنتی ویروسی حاوی ژن pdx-1 برای ترانسفکشن سلول‌های بنیادی در راستای ژن درمانی دیابت نوع 1 بود.روش بررسی: در این مطالعه تجربی ابتدا ژن pdx-1 از حامل pcdna3.1-pdx-1به وسیله pcr تکثیر و در حامل ptg19–tکلون شد. سپس ژن pdx-1 در بالا دست ژن ires–egfpدر حامل pires2–egfp ساب کلون شد. در مرحله بعد قطعات کلون شده‌ ires–egfp و نیز pdx-1 با هضم آنزیمی ‌از حامل مربوطه جداسازی و به درون سازه ی بیانی لنتی ویروسی psintrem در بالا دست ژن tre-cmvکلون شدند. سازه‌ی نهایی پس از تعیین توالی به سلول‌های hek293 ترانسفکت شد و بیان ژن pdx-1 به وسیله آنالیز فلوسایتومتری و میکروسکوپ معکوس فلورسنت ارزیابی شد.یافته‌ها: نتایج فلوسایتومتری و نیز مشاهده مستقیم با میکروسکوپ معکوس فلورسنت، نشانگر تایید بیان ژن‌های pdx-1 و gfp در سلول‌های hek293 ترانسفکت شده با سازه نوترکیب نهایی بود.نتیجه‌گیری: با توجه به این که سازه حاضر به منظور تضمین بیان طولانی مدت با بازدهی بالا در سلول‌های بنیادی طراحی شده و از سامانه ی القایی tet onهای در آن استفاده شد، می‌تواند یکی از بهترین سازه‌ها در جهت انتقال هر نوع ژن به سلول‌های بنیادی باشد.