بررسی اثر فنوتیپی و ژنوتیپی اسانس الکلی مرزه خوزستانی و نانوکمپلکس مس بر بیان ژن آلکالین پروتئاز در پسودوموناس آئروژینوزا به روش " rt-pcr"

زمینه و هدف: پسودوموناس آئروژینوزا یک باسیل گرم منفی وپاتوژن فرصت طلب بوده که در بیماران با نقص سیستم ایمنی مرگ و میر بالایی ایجاد می کند. عمده فعالیت ضدمیکروبی اسانس مرزه خوزستانی به دلیل اجزای فنلی کارواکرول است. نانومواد به دلیل سمیت کم برای مبارزه با میکروب های بیماری زا می توانند انتخاب مناسبی باشند. هدف این مطالعه تعیین و بررسی تاثیر اسانس الکلی مرزه خوزستانی و نانوکمپلکس مس بر بیان ژن آلکالین پروتئاز پسودوموناس آئروژینوزا بوده است. روش بررسی: در این مطالعه نیمه تجربی که در سال1393 انجام شد، سویه های پسودوموناس آئروژینوزا از بیماران سوختگی در اهواز جداسازی شد و از طریق تست های استاندارد میکروبشناسی از قبیل؛ رنگ آمیزی گرم، کاتالاز، اکسیداز و تست اکسیداسیون بر فرمانتاسیون، تولید پیگمان و رشد در دمای ˚c42 تعیین هویت شدند. مطالعه با روش رقت سازی میزان حداقل غلظت مهاری(mic) اسانس و نانوکمپلکس علیه سویه های به دست آمد. پس از مواجهه با غلظت mic، تغییرات بیان ژن آلکالین پروتئاز به روش rtpcr مورد بررسی قرار گرفت. درصد حیات سویه های مورد مطالعه در حضور غلظت های مختلف اسانس و نانوکمپلکس با روشmtt assay تعیین شد. داده ها با استفاده از آزمون های آماری کروسکال والیس و تست تعقیبی شفه، فیشر، آنالیز واریانس و کولموگروف اسمیرنف تجزیه و تحلیل شدند. یافته ها: میزان mic اسانس برای سویه استاندارد و بالینی پسودوموناس آئروژینوزا به ترتیب 4و8 میکروگرم بر میلی لیتر و میزان mic نانوکمپلکس مس برای سویه استاندارد و بالینی پسودوموناس آئروژینوزا به ترتیب 25 و 50 میکروگرم بر میلی لیتر بوده است. مشخص شد که اسانس و نانوکمپلکس در غلظت mic دارای اثر مهاری علیه بیان ژن آلکالین پروتئاز بوده اند. نتیجه گیری: نتایج به دست آمده نشان می دهد که مرزه خوزستانی اثر ضد میکروبی و مهار بیان ژنی بیشتری نسبت به نانوکمپلکس بر روی ژن آلکالین پروتئاز دارد.

Evaluation of the Phenotypic and Genotypic Effects of Satureja Khuzestanica Essence and Copper Nanocomplex on the Expression of Alkaline Protease Gene in Pseudomonas Aeruginosa by RT-PCR Method

Background aim: Pseudomonas aeruginosa is a gramnegative bacillus and an opportunistic pathogen that causes high mortality in immunocompromised patients. The main antimicrobial activity of Satureja khuzestanica essence is due to carvacrol phenolic components. Nanomaterials can be a good choice because of low toxicity to fight pathogenic microbes. The aim of this study was to evaluate the effect of Satureja khuzestanica essence and copper nanocomplex on the expression of alkaline protease gene in Pseudomonas aeruginosa.Methods: In this study, minimum inhibitory concentration (MIC) of essence and nanocomplex were detected against the strains by microdilution broth method. After exposure to MIC concentration, the alteration of alkaline protease gene expression by RTPCR was investigated. The viability percentage was determined by MTT assay method in the presence of essence and nanocomplex.Results: The MIC of essence for standard and clinical p. aeruginosa strains was 4 and 8 mu;g/ml respectively, and the MIC for the standard and clinical p. aeruginosa strains was 25 and 50 mu;g/ml, respectively. It was found that essence and nanocomplex in MIC concentration had an inhibitory effect on the expression of alkaline protease gene.Conclusion: The results showed that the essence has a stronger antimicrobial and inhibitory effect on the expression of alkaline protease gene than the nanocomplex.