همسانه سازی و توالی یابی ژن‌های ویرولانس ompa و smpa اسینتوباکتر بامانی

زمینه و هدف: اسینتوباکتر بامانی یک پاتوژن نوظهور و مهم در بروز عفونت های مختلف از قبیل؛ عفونت دستگاه ادراری، بیمارستانی، مننژیت و دستگاه تنفسی می باشد. هدف از این مطالعه همسانه سازی و توالی یابی ژن های ویرولانس ompa و smpa اسینتوباکتر بامانی بیماریزا می باشد.مواد و روش ها: در این مطالعه نیمه تجربی، سویه بیماریزای اسینتوباکتر بامانی بر روی محیط های بلاد آگار و مک کانکی آگار کشت داده شد. تشخیص و تایید اسینتوباکتر بامانی به روش های میکروسکوپی، کشت میکروبی و بیوشیمیایی انجام شد. دو ژن ompa و smpa با تکنیک pcr تکثیر و درون وکتور پلاسمیدی ptz57r/t کلون شدند. صحت سازواره نوترکیب به دو روش pcr و هضم آنزیمی دوگانه انجام شد. دو ژن ompa و smpa کلون شده در پلاسمید ptz57r/t توالی یابی شدند. سپس ژن های ompa و smpa درون وکتور پروکاریوتی ساب کلون گردیده و بیان آنها در باکتری اشرشیا کلی به روش sds-page بررسی شد. یافته ها: سویه بیماریزای اسینتوباکتر بامانی با روش های بیوشیمیایی و میکروبیولوژی تایید شد. از الکتروفورز محصولات pcr دو باند 1150 و 411 جفت بازی به دست آمد که به ترتیب مربوط به ژن های ompa و smpa بود. نتایج انجام pcr و هضم آنزیمی دوگانه روی پلاسمیدهای نوترکیب، درستی تشکیل ptz57r/t-ompa و ptz57r/t-smpa را نشان داد. نتایج تعیین توالی، صحت کلون سازی را مشخص نمود. نتیجه گیری: نتایج به دست آمده نشان داد که پلاسمیدptz57r/t برای کلون سازی قطعات بزرگdna مناسب می باشد و با توجه به حفاظت شدگی بالای دو ژن ompa و smpa برای ساخت واکسن می توان از آنها استفاده نمود.

Cloning and Sequencing of the ompA and smpA Virulence Genes of Acentobacter baumannii Isolated in Clinical Samples

AbstractBackground and aim: Acinetobacter baumannii is one of the emerging and important pathogens in various infections such as urinary tract infection, hospitals, meningitis and respiratory tract. The aim of this research is cloning and sequencing of ompA and smpA virulence genes of A. baumannii. Methods: In this experimental study, the pathogenic A. baumannii was cultured on blood agar and macconkey agar mediums. Recognition of A. baumannii with microscopic, microbiologic and biochemical tests were performed. ompA and smpA genes were amplified by PCR and then cloned into the pTZ57R/T vector. The accuracy of the recombinant construct was carried out with PCR and enzymatic double digestion and then the both of ompA and smpA genes were sequenced. The evaluation of bacterial expression of these genes was performed with SDSPSGE method in E. coli. Result: The pathogenic A. baumannii was confirmed in biochemical and microbiological methods. After electrophoresis of the PCR products, the 1150 and 411 bp fragments of ompA and smpA genes were obtained, respectively. The results of PCR and double digestions on recombinant plasmids showed that the pTZ57R/TompA and pTZ57R/TsmpA were generated. The sequencing results confirmed the accuracy of the gene cloning. Conclusion: The results showed that the pTZ57R/T is a suitable vector for the cloning of large fragment of PCR products and ompA and smpA are two highly conserved genes that appropriate for use as DNA vaccine.