طراحی و ساخت یک پلاسمید عرضه سطحی حاوی قطعه ژنی رمزگذار پروتئین e6 نوترکیب ویروس پاپیلومای انسانی تیپ 18 جهت بیان در مخمر yarrowia lipolytica

مقدمه: ویروس های پاپیلومای انسانی (hpv) با بیش از 100 تیپ، به دو دسته با ریسک پایین و بالا تقسیم می شوند که تیپ های 16 و 18 به‌تنهایی در 70% موارد سرطان گردنه رحم دخیل اند. در حال حاضر، توسعه پروتئین های نوترکیب hpv با هدف واکسیناسیون یا درمان مورد توجه دانشمندان می‌باشد. از این رو، مطالعه حاضر با هدف ساخت یک پلاسمید نوترکیب عرضه‌کننده در سطح رمزگذار پروتئین e6 ویروس پاپیلومای انسانی تیپ 18 انجام شد.روش‌کار: قطعه ژنی رمزگذار پروتئین e6 تیپ 18 ویروس پاپیلومای انسانی (hpv18) با استفاده از dna فرد مبتلا به ویروس به‌عنوان الگو، با روش pcr آشیانه ای مورد تکثیر قرار گرفت و پس از برش آنزیمی دوگانه hind iii و sfii، به درون پلاسمید عرضه کننده در سطح pina1317ylcwp110 همسانه سازی شد.یافته ها: روش های مولکولی نظیر pcr و برش آنزیمی دوگانه صحت همسانه سازی پلاسمید نوترکیب pina1317ylcwp110e6 را مورد تایید قرار داد. همچنین، نتایج به‌دست آمده از تعیین توالی به‌روش سنگر و هم ردیفی با داده های موجود در بانک ژن منجر به تایید نهایی صحت توالی، ترادف و چارچوب قرار گرفتن قطعه ژنی در جایگاه مناسب گردید.نتیجه گیری: نتایج این مطالعه، همسانه سازی موفق قطعه ژنی رمزگذار پروتئین e6 ویروس hpv18 را در پلاسمید عرضه کننده در سطح pina1317ylcwp110e6 در جایگاه و جهت مناسب مورد تایید قرار داد. این پلاسمید در صورت بیان در میزبان مخمری yarrowia lipolytica، قابلیت استفاده به‌عنوان واکسن، مارکر مولکولی یا جنبه درمانی خواهد داشت.

Developing a plasmid for surface display containing the recombinant E6 protein of human papilloma virus type 18 for expression in yeast Yarrowia lipolytica

Introduction: Human papillomaviruses (HPV) with more than 100 types are categorized as lowrisk and highrisk types. Types 16 and 18 of the virus alone are involved in 70% of cervical cancers. Currently, development of recombinant proteins of HPV for vaccination or therapy purposes has attracted scientists. Therefore, the present study was performed aimed to construct a surface display plasmid encoding E6 protein of human papillomavirus type 18.Methods: The DNA fragment encoding E6 protein of HPV18 was amplified by nestedPCR using DNA of a HPV18 positive person as PCR template. Then, the amplified fragment was double digested with HindIII and SfiI and cloned into the surface display plasmid pINA1317YLCWP110.Results: Cloning of E6 protein encoding gene fragment into pINA1317YLCWP110 plasmid was confirmed using PCR and restriction endonuclease double digestion. Also, the results of Sanger sequencing of the recombinant pINA1317YLCWP110E6 plasmid and alignment to gene bank further ensured the sequence accuracy, cloning position and reading frame of the gene in the recombinant vector.Conclusion: DNA fragment encoding E6 protein of HPV18 was successfully cloned into surface display plasmid pINA1317YLCWP110 in appropriate locus and frame. Altogether, the recombinant pINA1317YLCWP110E6 plasmid constructed in this study can be expressed in the yeast host Yarrowia lipolytica and the resulted E6 protein may be used as a prophylactic or therapeutic vaccine or molecular marker.