بررسی ارتباط میان آسیب dna اسپرم و میزان بیان mirna‌های القاء کننده آپوپتوز mir15a/16 و ژن ضد آپوپتوز bcl2

مقدمه: یکی از عوامل ایجاد کننده آسیب در dna اسپرم، آپوپتوز است. با توجه به نقش حیاتی میکروrna‌ها در فرآیندهای مختلف پاتوفیزیولوژیک، احتمال کنترل فرآیند آپوپتوز در dna اسپرم نیز توسط میکروrnaها مطرح شده است. مطالعه حاضر با هدف تعیین ارتباط میان میزان آسیب dna اسپرم و سطح بیان mir15a/16 و ژن ضد آپوپتوز bcl2 انجام شد. روش‌کار: این مطالعه تجربی در سال 1396 بر روی 30 بیمار مراجعه کننده به مرکز درمان ناباروری بیمارستان طالقانی شهر تهران صورت گرفت. نمونه مایع منی بعد از 32 روز پرهیز از نزدیکی جمع‌آوری و مطابق با معیارهای سازمان جهانی بهداشت مورد آنالیز قرار گرفت. آماده‌سازی نمونه اسپرم با روش سانتریفیوژ شیب غلظت انجام شد. آسیب dna اسپرم با تست بررسی ساختار کروماتین اسپرم مورد ارزیابی قرار گرفت و بر اساس میزان آسیب dna، نمونه ها به دو گروه با dfi بیشتر یا مساوی 30 و dfi کمتر از 30 تقسیم شدند. میزان بیان mir15a/16 و ژن bcl2 در نمونه بیماران با روش ریل تایم اندازه گیری شد. تجزیه و تحلیل داده‌ها با استفاده از نرم‌افزار آماری spss (نسخه 22) و آزمون‌های تی مستقل و بررسی بیان ژن با نرم‌افزار rest 2009 انجام شد. میزان p کمتر از 0.05 معنی‌دار در نظر گرفته شد. یافته ها: ارتباط منفی معنی داری بین dfi بیشتر یا مساوی 30 با حرکت و مورفولوژی نرمال اسپرم مشاهده شد (0.05>p). میزان بیان mir15a/16 در گروه با dfi بیشتر یا مساوی 30 در مقایسه با گروه کنترل (dfi کمتر از 30)، به‌طور قابل توجهی افزایش و بیان bcl2 به‌طور معنی‌داری کاهش یافته بود (0.05>p). نتیجه‌گیری: کاهش بیان bcl2 به‌دنبال افزایش mir15a/16 در هسته اسپرم، منجر به افزایش آسیب dna در اسپرم می شود. ارزیابی mirnas و ژن مرتبط با آپوپتوز می تواند در آینده به عنوان یک ابزار تشخیصی جهت اطمینان از یکپارچگی dna اسپرم در زوجین نابارور با عامل مردانه مطرح شود.

The relationship between Sperm DNA fragmentation and differential expression of human sperm proapoptotic miR15a/16 and antiapoptotic BCL2 gene

Introduction: Apoptosis is one of the etiologies of sperm DNA damage. Considering the crucial role of micro RNAs in multiple pathophysiological processes, the possibility of controlling the apoptosis process in sperm DNA by microRNAs has been proposed. This study was performed with aim to investigate the relationship between sperm DNA fragmentation and expression level of miR15a/16 and Antiapoptotic BCL2 gene. Methods: This experimental study was performed on 30 patients referred to Tehran Taleghani Hospital infertility center in 2017. After 23 days of abstinence, semen was collected and analyzed based on WHO criteria. Sperm preparation was performed using density gradient centrifugation technique. To assess sperm DNA fragmentation, Sperm Chromatin Structure Assay was carried out and based on the level of DNA fragmentation, the samples were divided into two groups: DFI ≥30% and DFI<30%. The expression level of miR15a/16 and BCL2 was measured by quantitative Real Time PCR. Data were analyzed using SPSS software (version 22) and independent ttest. The gene expression level was analyzed using REST 2009 software. P < 0.05 was considered statistically significant. Results: A significantnegative relationship was found between DFI ≥30% with motility and normal morphology of spermatozoa (p<0.05). The expression level of miR15a/16 was significantly increased, and the expression level of BCL2 gene was significantly decreased in patients with DFI ≥30% compared with DFI<30% (p<0.05). Conclusion: Decreased expression of BCL2 following increased miR161 leads to increased sperm DNA fragmentation. Assessment of miR15a and apoptosisrelated gene can be proposed as a diagnosing tool to ensure of sperm DNA integrity in male factor infertility cases in future.