کلونینگ، بیان و تخلیص پروتیین نوترکیب فیوژن tat-nef ویروس hiv-1 در سیستم بیانی پروکاریوتی

زمینه و هدف: یکی از پروتیین‌های مهم ویروس hiv-1 به نام nef نقش مهمی در چرخه تکثیر ویروس و پیشرفت بیماری ایدز دارد و القای پاسخ ایمنی بر ضد آن می‌تواند تا حدی عفونت ویروسی را مهار نماید. به علاوه، بخشی از ناحیه پروتیین فعال کننده رونویسی (tat، اسید آمینه‌های 48 تا 60) از ویروس hiv توانسته است به عنوان یک پپتید نفوذ کننده سلولی (cpp) عمل نماید. در این تحقیق، برای اولین بار کلونینگ و بیان فیوژن tat-nef در باکتری اشرشیاکلی صورت گرفت. تایید بیان پروتیین توسط آنالیز وسترن بلات و تخلیص آن از طریق روش رنگ آمیزی معکوس انجام شد. مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، ابتدا کلونینگ فیوژن tat-nef در وکتور بیانی pgex6p2 صورت گرفت. سپس القای بیان پروتیین نوترکیب tat-nef در باکتری اشرشیا کلی سویه bl21 (de3) توسط القا کننده iptg انجام شد. تایید بیان از طریق تکنیک sds-page و وسترن بلات با استفاده از آنتی‌بادی منوکلونال ضد nef صورت گرفت. سپس، تخلیص پروتیین فیوژن توسط تکنیک رنگ آمیزی معکوس از روی ژل انجام شد.یافته‌ها: نتایج آنالیز pcr و هضم آنزیمی، وجود باند واضح حدود 726 جفت باز را روی ژل آگارز تایید کرد که نشان‌گر کلونینگ صحیح فیوژن tat-nef در وکتور بیان پروکاریوتی pgex6p2 بود. هم‌چنین، وجود باند پروتیینی حدود 54 کیلودالتون روی ژل sds-page نشان‌گر بیان پروتیین tat-nef بود که توسط آنتی‌بادی منوکلونال ضد nef در آنالیز وسترن بلات تایید شد. نتیجه‌گیری: پروتیین فیوژن نوترکیب tat-nef تخلیص شده به عنوان یک آنتی ژن برای طراحی واکسن پروتیینی در مقابل عفونت ویروس hiv استفاده خواهد شد.