همسانه سازی و بیان ایمونوتوکسین نوترکیب با استفاده از توکسین دیفتری و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیت

زمینه و هدف: ایمونوتوکسین یک توکسین هدف‌مند است که از اتصال دو بخش مجزا (بخش ایمنی و بخش توکسینی) با واسط شیمیایی یا پپتیدی اختصاصی تشکیل می‌شود. هدف اصلی تحقیق حاضر تولید پروتیین هیبریدی و نوترکیب مشتمل بر توکسین دیفتری و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیتی است. مواد و روش ها: با توجه به ساختار اولین ایمنوتوکسین تجاری نوترکیب (اونتاک، پروتیین هیبریدی شامل توکسین دیفتری و اینترلوکین 2)، ژن به رمزدرآورنده توکسین دیفتری (dt) و فاکتور محرک رشد کلنی گرانولوسیت (g-csf) با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و قالب پلاسمیدی pet-idz3 (پلاسمید pet21 حاوی ژن رمز کننده ایمونوتوکسین اونتاک) و pet-gcsf (پلاسمید pet23 حاوی ژن رمز کننده g-csf) تکثیر یافت. سپس اتصال دو قطعه ژنی با استفاده از پرایمرهای اختصاصی و در طی روش soeing pcr انجام شد. در ادامه، قطعه ژنی هیبریدی درون وکتور (+) pet21a منتقل گردید تا سازه ژنی pet-dt-gcsf به دست آید. ساخت این سازه ژنی از طریق توالی یابی، sds-page و وسترن بلات مورد تایید قرار گرفت.یافته‌ها: ژن به رمز درآورنده ایمونوتوکسین نوترکیب بین جایگاه‌های آنزیمی ecori و ndei درون وکتور (+) pet21a به صورت صحیح کلون گردید و تولید سویه مولد ایمونوتوکسین نوترکیب dt-gcsf با استفاده از روش‌های مرسوم مورد تایید قرار گرفت. نتیجه‌گیری: سیتوکین هیبرید پروتیین، dt-gcsf، می‌تواند در راستای مقابله با سلول‌های سرطانی و مهار آن‌ها که در سطح سلولی آن‌ها گیرنده‌های g-csf زیاد بیان می‌شوند، مورد استفاده قرار گیرد.