موتاسیون هدف‌مند، کلونینگ و بیان پروتیین استرپتوکیناز به منظور تولید مولکول جدید مناسب برای پگیلاسیون

زمینه و هدف: استرپتوکیناز رایج‌ترین و در حال حاضر مقرون به صرفه‌ترین داروی فیبرینولیتیک برای درمان سکته‌های قلبی و گرفتگی رگ‌ها می‌باشد. علی‌رغم مزایا و برتری‌هایی که استرپتوکیناز نسبت به داروهای ترومبولیتیک دیگر دارد، تجویز آن می‌تواند با مشکلاتی از جمله تحریک سیستم ایمنی بدن و هموراژی همراه بوده و هم‌چنین نیمه عمر نسبتا پایین آن منجر به درمان ناقص شود. پگیلاسیون یکی از روش‌های رایج برای اصلاح برخی از این معایب می‌باشد. مواد و روش‌ها: در تحقیق حاضر برای طراحی و تولید پروتیینی مناسب برای پگیلاسیون اختصاصی با سیستیین، نرم افزار spdbviewer استفاده شد. پس از انجام موتاسیون هدف‌مند به روش soeing pcr، ژن موتانت (sk45cys) و غیرموتانت (ski) به درون وکتور pet26-b وارد شده و ساختارهای حاصل به درون اشرشیاکلی ترنسفرم شدند. کلون‌های حاصل پس از رشد توسط iptg بیان شده و بیان پروتیین‌ها توسط sd-page و وسترن بلاتینگ بررسی گردید. پروتیین‌ها با تکنیک افینیتی کروماتوگرافی با ستونni-nta تخلیص شدند و فعالیت آن‌ها با استفاده از روش کروموژنیک و از طریق سوبسترای s2251 بررسی شد. یافته‌ها: نتایج حاصل از فعالیت سنجی نشان داد که فعالیت آمیدولیتیک sk45cys در مقایسه با ski، پس از 30 دقیقه از تشکیل کمپلکس با پلاسمینوژن، 10 درصد افزایش فعالیت داشته است. نتیجه‌گیری: نتایج نشان دادند که با توجه به سطحی بودن مکان سیستیین جایگزین شده و هم‌چنین افزایش نسبی فعالیت sk45cys این پروتیین می‌تواند مولکول مناسبی برای انجام فرآیند پگیلاسیون اختصاصی باشد.