همسانه سازی ژن فیوژن پروتیین ویروس بیماری نیوکاسل در شاتل وکتور بکمیدی مشتق از باکیولوویروس به منظور بیان در لاین سلولی حشره

زمینه و هدف: ویروس بیماری نیوکاسل (new castle disease virus) از مهم‌ترین عوامل بیماری‌زا در طیور است و واکسیناسیون هم‌چنان به عنوان راهکاری موثر برای کنترل این بیماری مطرح است. فیوژن پروتیین (f) قرار گرفته روی سطح ویروس بیماری نیوکاسل، در بیماری‌زایی این ویروس نقش اساسی دارد و می‌تواند به تنهایی باعث القا ایمنی محافظتی گردد. با این پیش زمینه، هدف ما، تولید یک سازه نوترکیب (کد کننده پروتیین f) از شاتل وکتور بکمیدی مشتق از باکیولوویروس به منظور بیان آن در لاین سلولی حشره بود.مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، ابتدا ژن کامل f از سویه غیر بیماری‌زای لاسوتا ویروس بیماری نیوکاسل، به منظور تولید رشته dna مکمل (cdna)، با تکنیک rt-pcr فراوان سازی گردید. محصول تکثیر، در وکتور کلونینگ a/t و سپس در پلاسمید دهنده pfastbac dual همسانه سازی گردید. بعد از تایید فرآیند کلونینگ با دو روش pcr و آنالیز هضم آنزیمی، صحت توالی با روش تعیین توالی تایید شد. در نهایت بکمید نوترکیب واجد ژن f متعاقباً در سویه باکتریایی bac10dh تولید و سازه فوق با یک پنل اختصاصی pcr با استفاده از پرایمرهای اختصاصی ژن f و پرایمرهای عمومی 13m مورد تایید قرار گرفت.یافته‌ها: تحلیل تست‌های تاییدی نشان داد که سازه نوترکیب بکمیدی- بیان کننده ژن پروتیین f با توالی و چارچوب صحیح- با موفقیت ساخته شده است.نتیجه‌گیری: محصول این سازه نوترکیب واجد ژن f علاوه بر کاربرد مستقل در القا ایمنی محافظتی می‌تواند به همراه محصول دیگر باکیولوویروس‌های نوترکیب- بیان کننده ژن‌های hn و np برای تولید ذره شبه ویروسی (virus-like particle,vlp) ویروس فوق در لاین سلولی حشره- مورد استفاده قرار گیرد.