بررسی خواص آنتی ژنیک پروتیین نو ترکیب هیالورونیداز A استرپتوکوک پیوژنز بیان شده در باکتری اشریشیا کلی

چکیدهزمینه و هدف: هیالورونیداز a از جمله پروتیین‎های ترشحی استرپتوکوک پیوژن بوده که دارای قدرت آنتی ژنیک می‎باشد. امروزه با ردیابی آنتی بادی‎های ضد این پروتیین روند عفونت ناشی از این باکتری پی‎گیری می‎شود. در این تحقیق سعی گردیده تا تولید پروتیین نوترکیب هیالورونیداز a در باکتری اشریشیا کلی انجام گیرد. مواد و روش ها: در این تحقیق تجربی با طراحی پرایمر اختصاصی و استفاده از روش pcr، ژن هیالورونیداز a از استرپتوکوک پیوژن تکثیر گردید. پس از تخلیص، ژن فوق در ناقل پلاسمیدی pet32a جهت بیان کلون گردید. سپس ساختار پلاسمیدی pet32a -hyla وارد باکتری اشریشیا کلی سویه bl21- de3-plyss شد. تولید پروتیین با القا توسط iptg صورت گرفت. پروتیین نوترکیب با استفاده از کیت ni-nta خالص و میزان پروتیین با استفاده از روش برادفورد اندازه گیری شد. آزمایش وسترن بلات برای تایید پروتیین نوترکیب انجام شد.یافته ها: ترادف نوکلیوتیدی ژن تکثیر شده توسط روش pcr با ژن هیالورونیداز a استرپتوکوک پیوژن یکسان بود. تولید پروتیین نوترکیب هیالورونیداز a با القا پلاسمید pet32a -hyla توسطiptg انجام گردید. تخلیص پروتیین با روش کروماتوگرافی تمایلی و با استفاده از کیت ni-nta صورت گرفت. میزان پروتیین خالص شده برابر 500 میکروگرم در میلی لیتر به دست آمد. سرم موش واجد آنتی هیالورونیداز a در روش وسترن بلات با پروتیین تولید شده واکنش داد.نتیجه گیری: تولید پروتیین نوترکیب هیالورونیداز a در میزبان اشریشیا کلی نیز امکان پذیر است. پروتیین تولید شده خاصیت آنتی ژنیک خود را به خوبی حفظ می‎کند. واژگان کلیدی: استرپوکوک پیوژن، اشریشیا کلی، بیان ژن، ژن هیالورونیداز a