تکثیر، کلونینگ و بیان ژن Bp26((Omp28 Brucella Melitensis بومی استان مرکزی به منظور تولید پروتیین نو ترکیب Bp26

چکیدهزمینه و هدف: بروسلوز بیماری ناتوان کننده‎ای است که هزینه گزافی را بر اقتصاد و اجتماع تحمیل می‎کند. بنابراین استفاده از بهترین، دقیق‎‎‎‎‎‎ترین و به صرفه‎ترین روش برای تشخیص این بیماری ضروری می‎باشد. عامل شایع بروسلوز در ایران بروسلا بوده و پروتیین bp26این باکتری خاصیت آنتی ژنیسیته خوبی دارد. بنابراین هدف از این تحقیق تولید پروتیین bp26 نوترکیب از باکتری بروسلا جهت استفاده در کیت تشخیص بروسلوز می‎باشد. مواد و روش‎ها: در این مطالعه بن?ادی - کاربردی، از باکتری کشت شده، تخلیص dna ژنومیک به روش پروتییناز k و فنل/کلرفرم انجام شد. سپس با توجه به اطلاعات توالی ژن bp26 brucella melitensis موجود در بانک اطلاعات ژن، برای ژن مذکور پرایمر طراحی شده و واکنش زنجیره‌ای پلیمراز راه‎اندازی، بهینه‎سازی و انجام شد. در ادامه محصول واکنش ابتدا در وکتور ptz57r/t الحاق گردید و پس از آن در وکتور pet-28a کلون گردید. وکتور نو‎ترکیب به میزبان e. coli bl21(de3) منتقل گردید و پروتیین نوترکیب و با ستون کروماتو‎گرافی ni-nta علیه his tag تخلیص گردید.یافته‎ها: اندازه ژن تکثیر شده با اندازه بخشی از ژن bp26 brucella melitensis موجود در بانک اطلاعات ژن مطابقت داشت. ژن bp26 بدون القا با iptg به میزان کم بیان شده و با افزودن آن به غلظت 1 میلی‎مولار به محیط کشت در ساعت سوم، حداکثر بیان مشاهده شد.نتیجه‎گیری: تولید پروتیین نوترکیب bp26 از باکتری ملیتنسیس بومی استان مرکزی با استفاده از ناقل پلاسمیدی pet-28a امکان‎پذیر گردید. با توجه به اهمیت این پروتیین و به منظور بررسی‎‎های بیشتر در آینده در خصوص تهیه کیت تشخیص بروسلوز، امکان تولید آن در کشور فراهم شد.واژگان کلیدی: بروسلا ملیتنسیس، بروسلوزیس، پروتیین bp26، ژن bp26