همسانه سازی، امتزاج و بررسی بیان کاست ژنی ctB و N ترمینال ipaD در باکتری اشرشیاکلی

چکیدهزمینه و هدف: شیگلا دیسانتری یکی از عوامل اصلی بیماری اسهال در انسان بوده که واکسنی علیه آن وجود ندارد. یکی از مهم‌ترین فاکتورهای بیماری‌زای موجود در شیگلا، پروتیین ipad است. همسانه سازیn ترمینال ژن ipad به همراه ژنctb که دارای نقش ادجوانتی و حاملی می‌باشد به شکل یک واکسن نوترکیب می‌تواند سبب تقویت پاسخ ایمنی مخاطی شود. مواد و روش‎ها: در این مطالعه تجربی، طراحی پرایمر برای ژن‌های ipad و ctb بر مبنای طراحی انجام شده به منظور ساخت کاست ژنی، صورت گرفت. واکنش pcr برای تکثیر این قطعات انجام و هر یک از قطعات تکثیر شده درون وکتور pgem-teasy همسانه سازی شدند. هر دو وکتور توسط آنزیم‎های محدودالاثر hind iii و xho i برش خورده و در نهایت ژن ipad به ژن ctb ملحق گردید. در ادامه کاست ژنی ctb-ipad و وکتور بیانی pet28a(+) توسط آنزیم‎های محدودالاثر sali و hindiii برش خورده و کاست ctb-ipad در وکتور بیانی زیر همسانه سازی و بررسی بیان کاست ژنی انجام گرفت. یافته‎ها: در این تحقیق، n ترمینال ژن ipad به عنوان یک آنتی ژن کاندید واکسن ژنی به ناحیه c ترمینال ژنctb که دارای نقش ادجوانتی و حاملی می‌باشد، متصل گردید. ژن‎های ممزوجی ctb-ipad در وکتور بیانی pet28a(+) توسط pcr و هضم به وسیله آنزیم‎های با اثر محدود تایید شد. هم‎چنین پروتیین نوترکیب تولید شده به وسیله sds-page و لکه‎گذاری وسترن تایید گردید.نتیجه گیری: با توجه به مطالعات گذشته و مشابه، ایجاد کاست ژنیctb-ipad و بررسی بیان آن، هدف مورد انتظار این تحقیق بود. امید می‌رود با بیان پروتیین این کاست ژنی و در صورت تولید آنتی بادی مناسب بتوان به واکسن مناسب علیه شیگلا دست یافت. واژگان کلیدی: ادجوانت، همسانه سازی، ژن ctb، فیوژن، ژن ipad، شیگلوز.