بیان نوترکیب و تخلیص ناحیه 1 فاکتور کشنده باسیلوس آنتراسیس در Escherichia coli و تولید آنتی بادی پلی کلونال علیه آن در موش سوری

چکیدهزمینه و هدف: سیاه‎زخم یک بیماری مشترک بین انسان و دام است. عامل ایجاد کننده بیماری، باکتری باسیلوس آنتراسیس می‎باشد که آنتی‎ژن حفاظت‎کننده و ناحیه یک فاکتور کشنده (lfd1) ایمونوژن‎های قوی این باکتری بوده و همواره به عنوان کاندیدای واکسن علیه باسیلوس آنتراسیس در نظر گرفته شده‎اند. هدف این مطالعه بیان و تخلیص lfd1 در باکتری escherichia coli و تولید آنتی‎بادی پلی‎کلونال علیه آن در موش‎ سوری می‎باشد.مواد و روش‎ها: در این مطالعه تجربی، ژن lfd1 با جایگاه‎های برش آنزیمی bamhi و xhoi با واکنش pcr تکثیر و بعد از جداسازی، در وکتور بیانی pet28a(+) همسانه‎سازی گردید. به منظور بیان ژن، این وکتور به باکتری‎های صلاحیت‎دار e.coli-bl21(de3)plyss تراریخت شد. بیان ژن lfd1 تحت القایiptg انجام و بعد از تخلیص پروتیین با استفاده از کروماتوگرافی تمایلی، آنتی‎ژن حاصل در چهار نوبت به موش‎های سوری تزریق شد. آنتی‎بادی پلی‎کلونال تولید شده در سرم موش‎ها اندازه‎گیری گردید.یافته‎ها: ژن lfd1 کلون شده در وکتور بیانی pet28a(+) به وسیله pcr، هضم آنزیمی و توالی‎یابی تایید شد. هم‎چنین پروتیین نوترکیب تولید شده به وسیله sds-page و لکه‎گذاری وسترن تایید گردید. در نهایت آنتی‎بادی پلی‎کلونال تولید شده از سرم موش‎ سوری جدا شده و به وسیله تست الایزا ارزیابی و تایید گردید.نتیجه‎گیری: با توجه به بیان مناسب، تولید آسان این آنتی‎ژن و تیتر آنتی‎بادی پلی‎کلونال تولید شده علیه آنتی‎ژن lfd1 به دلیل ایمونوژنیسیته آن در موش‎های سوری، می‎توان آن را به عنوان کاندید واکسن علیه سیاه‎زخم در نظر گرفت.واژگان‎کلیدی: سیاه‎زخم، باسیلوس آنتراسیس، ایمونوژن، آنتی‎بادی پلی‎کلونال