|
|
|
|
ساخت پلاسمید pDS132::?icsA جهت حذف هدفمند نواحی از ژن icsA به منظور تولید واکسن زنده تخفیف حدت یافته شیگلا
|
|
|
|
|
|
|
|
نویسنده
|
سعادتی مجتبی ,یخچالی باقر محمد ,احمدی دانش حورا ,میرزایی مرتضی ,باقری کمال ,زارع مختار ,حسینی مصطفی ,نیری فسایی بهار
|
|
منبع
|
مجله دانشگاه علوم پزشكي اراك - 1391 - دوره : 15 - شماره : 2 - صفحه:35 -47
|
|
چکیده
|
چکیدهزمینه و هدف: واکسن‌های زنده تخفیف حدت یافته شیگلا پاسخ‌های امیدبخشی در ایجاد ایمنی حفاظتی در آزمایشات بالینی بر روی انسان را نشان داده‌اند. هدف از این تحقیق طراحی و ساخت پلاسمید pds132::?icsa به عنوان یک ناقل انتحاری برای حذف هدفمند بخشی از ژن icsa در شیگلا می‌باشد.مواد و روش‌ها: در این مطالعه تجربی، گونه و سرووار شیگلای جدا شده از نمونه‌های کودکان مبتلا به اسهال، در بیمارستان‌های فیروزآبادی و میلاد تهران، با استفاده از آزمایش سرم شناسی و واکنش زنجیره‌ای پلیمراز مورد تایید قرار گرفت. آغازگرهای شناسایی ژن icsa طراحی و سپس در حامل pgem-5zf همسان سازی و تعیین توالی گردید. بر اساس نقشه برش آنزیمی ژن icsa، 1751 جفت باز از ژن icsa با استفاده از آنزیم محدودکننده hinc? حذف و ژن جهش یافته ?icsa به طور موفقیت آمیزی ایجاد گردید. حامل pgem?icsa با استفاده از آنزیم‌های sphi و sali هضم گردید و سپس در حامل انتحاری (psd132) همسانه سازی شد. صحت فرآیند با آزمایش‌های فنوتیپی و ژنوتیپی تایید گردید. یافته‌ها: سویه شیگلا دیسانتری تیپ1 با آزمایش سرولوژیکی و pcr تایید گردید. توالی ژن icsa سویه بومی با سویه‌های ثبت شده در بانک ژنی یکسان بود. حامل انتحاری pds132::?icsa با در بر داشتن 1484 جفت باز، مشتق شده از ژن icsa می تواند به عنوان یک ناقل انتحاری اختصاصی در ایجاد تداخل در ژن icsa به کار رود.نتیجه‌گیری: استفاده از سیستم‌های انتحاری ایجاد جهش هدف مند را تسهیل و در مقایسه با سایر تکنیک‌های اولیه مانند پاساژ متوالی روش اختصاصی و موثرتری می‌باشد.واژگان کلیدی: تبادل آللی، ژن icsa ، شیگلا دیسانتری تیپ 1، شیگلوز، ناقل انتحاری
|
|
کلیدواژه
|
تبادل آللی ,ژن icsA ,شیگلا دیسانتری تیپ 1 ,شیگلوز ,ناقل انتحاری ,Allelic exchange ,IcsA ,Shigella dysenteriae type 1 ,Shigellosis ,Suicide vector
|
|
آدرس
|
دانشگاه جامع امام حسین (ع), استاد، دکتری باکتری شناسی، گروه علوم زیستی، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران, ایران, پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری, ایران, پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و زیست فناوری, کارشناس ارشد سلولی و مولکولی، گروه صنعت و محیط زیست پژوهشگاه ملی مهندسی ژنتیک و بیوتکنولوژی، تهران، ایران, ایران, دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج), کارشناس ارشد زیست شناسی سلولی و مولکولی، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا (عج)، تهران، ایران, ایران, دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج), دانشجوی کارشناسی ارشد، گروه میکروبیولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا (عج)، تهران، ایران, ایران, دانشگاه جامع امام حسین (ع), کارشناس ارشد سلولی و مولکولی، گروه علوم زیستی، دانشگاه جامع امام حسین (ع)، تهران، ایران, ایران, دانشگاه علوم پزشکی بقیه الله (عج), کارشناس ارشد زیست شناسی سلولی و مولکولی، مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی کاربردی، دانشگاه علوم پزشکی بقیه ا (عج)، تهران، ایران, ایران, دانشگاه تهران, استادیار، دکتری میکروبیولوژی، گروه میکروبیولوژی، دانشکده دامپزشکی دانشگاه تهران، تهران، ایران, ایران
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Authors
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|