کلونینگ و بیان پروتیین نوترکیب VP2 پارو ویروس سگی در دو سیستم باکتریایی و پروکاریوتی بدون سلول

چکیدهزمینه و هدف: اهمیت پروتیین vp2 پاروویروس سگی در اتصال به سلول‎های سرطانی انسانی و کیت‎های تشخیصی دامپزشکی سبب شده تا مطالعات گسترده‎ای در زمینه تولید این پروتیین صورت گیرد. هدف از انجام این پژوهش کلونینگ و تایید بیان پروتیین پوششی vp2 پاروویروس سگی در سیستم پروکاریوتی و بهینه نمودن بیان پروتیین vp2 در سیستم منحصر به فرد پروکاریوتی بدون سلول می‎باشد.مواد و روش‎ها: در این مطالعه تجربی، پلاسمید pet-21a vp2 با کلون کردن محصول pcr ژن vp2 پاروویروس سگی در پلاسمید بیانی pet-21a ساخته شد. توالی کلون شده ابتدا با روش کلونی pcr ارزیابی شده، سپس توسط هضم آنزیمی و توالی یابی مورد بررسی قرار گرفت. به منظور تولید پروتیین vp2 پلاسمید pet-21a vp2 در باکتری e.coli سویه روزتا rosetta(de3) منتقل و بیان این پروتیین توسط iptg القا گردید. پروتیین تولید شده در هر دو شرایط باکتریایی و بدون سلول توسط تکنیک sds page بررسی گردید و در نهایت به وسیله آنتی بادی منوکلونال علیه vp2 توسط تکنیک وسترن بلات ارزیابی گردید. یافته‎ها: کلونینگ صحیح ژن vp2 با هضم آنزیمی و تعیین توالی قطعه کلون شده به اثبات رسید. بیان پروتیین vp2 در دو سیستم باکتریایی و بدون سلول توسط sds page تایید شده و در نهایت پروتیین vp2 به وسیله وسترن بلات تایید گردید.نتیجه‎گیری: نتایج این تحقیق نشان داد، ژن vp2 در طی مراحل کلونینگ تکثیر شده و به خوبی در وکتور مورد نظر کلون گردیده است و بیان پروتیین در هر دو سیستم باکتریایی و بدون سلول به طور کامل مورد تایید قرار گرفته است.واژگان کلیدی: سیستم بدون سلول، بیان پروتیین سطحی، پاروویروس، ژن vp2