بیان استرپتودورناز نوترکیب در باکتری اشریشیا کلی

چکیده زمینه و هدف: در عفونت‌های چرکی پوستی، غلظت چرک در ارتباط با دزاکسی ریبو نوکلیوپروتیین هاست.استفاده از استرپتودورناز که یک دزاکسی ریبونوکلیاز است به همراه استرپتوکیناز به حل شدن ترشحات کمک می‎کند، در نتیجه ترمیم زخم در اثر خارج شدن چرک از بافت نکروز شده صورت می‎گیرد. هدف از این مطالعه تولید استرپتودورناز نوترکیب از سوش استرپتوکوک گروه a که از نظر تولید استرپتودورناز پر بازده است، توسط وکتور بیانی می‎باشد.مواد و روش‌ها: در این مطالعه بنیادی- کاربردی، dna ژنومی ژن استرپتودورناز با روش فنل- کلروفرم استخراج گردید، سپس با کمک پرایمرهای اختصاصی ویژه ژن استرپتودورناز، ژن مورد نظر با روش واکنش زنجیره ای پلی مراز تکثیر شد. ژن استرپتودورناز به دست آمده در ناقل پلاسمیدی sd1t4pgex جهت بیان کلون شد و پلاسمید sd1t4pgex وارد باکتری اشریشیاکلی سویه بی ال 21 گردید. تولید پروتیین با القا توسط ایزوپروپیل تیوگالاکتوپیرانوزید و بهینه سازی شرایط صورت گرفت. پروتیین نوترکیب با استفاده از کیت گلوتاتیون سفاروز 4 ب خالص گردید.یافته‌ها: ترادف نوکلیوتیدی محصول ژن واکنش زنجیره ای پلی مراز با ژن استرپتودورناز استرپتوکوک گروه a کاملاً یکسان بود. تولید پروتیین نوترکیب استرپتودورناز با القا پلاسمید sd1t4pgex توسط تیوگالاکتو پیرانوزید انجام گردید. تخلیص پروتیین با روش کروماتوگرافی تمایلی و با استفاده از کیت گلوتاتیون سفاروز 4 ب انجام شد. سرم موش واجد آنتی استرپتودورناز در روش وسترن بلات با پروتیین تولید شده واکنش داد.نتیجه‌گیری: تولیداسترپتودورناز نوترکیب با استفاده از ناقلین پلاسمیدی نظیر pgex در میزبان اشریشیاکلی نیز امکان پذیر است. پروتیین تولید شده خاصیت آنتی ژنیک خود را به خوبی حفظ می‎کند. با توجه به نیاز داخلی کشور و همچنین بازدهی کم تولید و بیماری‌زا بودن استرپتوکوک‌ها تولید این محصول به صورت نوترکیب امکان پذیر است.واژگان کلیدی: استرپتوکک گروه a، استرپتودورناز ، بیان ژن