تولید و تخلیص نواحی آنزیمی هیالورونیداز استرپتوکوک در باکتری

چکیده زمینه و هدف: استرپتوکوکوس پیوژنز آنزیم هیالورونیداز خارج سلولی تولید می‌کند که با انتشار ارگانیسم در طول عفونت ارتباط مستقیم دارد. آنزیم هیالورونیداز قادر به تجزیه هیالورونیک اسید یا سیمان بین بافتی می‌باشد. از این آنزیم میتوان در درمان سرطان‌ها استفاده نمود. هدف از تحقیق حاضر کلون کردن و بیان توالی نوکلیوتیدی که در فعالیت آنزیمی هیالورونیداز نقش دارد، می‌باشد.مواد و روش‌ها: ابتدا توالی نوکلیوتیدی از ژن هیالورونیداز که در فعالیت آنزیمی دخیل است، شناسایی گردید. سپس ناحیه مورد نظر توسط pcr تکثیر یافت. قطعه تکثیر یافته در وکتور pet32a الحاق شد. پلاسمید نوترکیب به سلول e.coli bl21-de3-plyss ترانسفورم گردید. سپس بیان ژن به وسیله iptg القا گردید. پروتیین تولید شده با روش کروماتوگرافی تمایلی و با استفاده از کیت ni-nta تخلیص گردید. برای تایید پروتیین تولید شده از تست وسترن بلات استفاده گردید.یافته‌ها: ترادف نوکلیوتیدی ژن تکثیر شده با ژن هیالورونیداز استرپتوکوکوس پیوژن یکسان بود. غلظت پروتیین تولیدشده و خالص شده با کیت ni- nta برابر 500 میلی‌گرم در میلی‌لیتر بود. سرم بیماران مبتلا به عفونت‌های استرپتوکوکی در روش وسترن بلات با پروتیین تولید شده واکنش داد.نتیجه‌گیری: به طور کلی تولید نواحی آنزیمی هیالورونیداز استرپتوکوک پیوژنز در باکتری اشریشیاکلی امکان پذیر می‌باشد. پروتیین تولید شده خاصیت آنتی ژنیک خود را به خوبی حفظ می‌کند. با توجه به نیاز داخلی کشور و هم‌چنین بازدهی کم تولید و بیماری زا بودن استرپتوکوک‌ها تولید این محصول به صورت نوترکیب امکان پذیر است.واژگان کلیدی: کلونینگ، بیان ژن، هیالورونیداز، استرپتوکوک پیوژنز