مهار پمپ افلاکس در سویه‌های کلینیکی سودوموناس آئروجینوزا با استفاده از سرترالین برای شکست مقاومت باکتری به سیپروفلوکساسین

زمینه و هدف پمپ افلاکس در سودوموناس آئروجینوزا باعث مقاومت آنتی‌بیوتیک‌های خانواده کینولون‌ها با اخراج آن از سلول سودوموناس می‌شود؛ بنابراین مهار این پمپ با کمک ترکیبات شیمیایی غیر‌فعال‌کننده فعالیت پمپ می‌تواند باعث مقابله با مقاومت دارویی باکتری شود. هدف از این پژوهش، ارزیابی استفاده از سرترالین به ‌عنوان مهارکننده پمپ افلاکس در سودوموناس آئروجینوزا برای کاهش مقاومت دارویی است.مواد و روش ها سویه‌های سودوموناس آئروجینوزای ارزیابی‌شده در این پژوهش از نمونه‌های بالینی بیماران جداسازی و پس از شناسایی آن‌ها با روش‌های میکروب‌شناسی، ‌مقاومت آن‌ها نسبت به سیپروفلوکساسین با روش کربی بائر ارزیابی شد. حداقل غلظت ممانعت‌کننده سیپروفلوکساسین با روش سریال رقتی محیط مایع در میکروپلیت و حداقل غلظت کشنده دارو با کشت و نیز روش‌ mtt برای سویه‌های مقاوم به داروی سودوموناس آئروجینوزا و سوش استاندارد سودوموناس آئروجینوزای 25873 ‌تعیین شد. بررسی شکست مقاومت با اضافه کردن سرترالین به محیط مولر هینتون آگار و تعیین قطر هاله سیپروفلوکساسین انجام شد. حضور پمپ افلاکس به روش فنوتیپی با استفاده از ماده دارویی سرترالین و روش سریال رقتی محیط مایع در میکروپلیت، روی سویه‌های مقاوم به سیپروفلوکساسین ارزیابی شد. وجود ژن مولد این پمپ به روش ژنوتایپی در سویه‌های مقاوم با انجام pcr تعیین شد. از سویه استاندارد pao1 سودوموناس آئروجینوزا به عنوان کنترل مثبت استفاده شد.  ملاحظات اخلاقی این پژوهش با کد اخلاق ir.iau.b.rec.1401.011 به تصویب کمیته اخلاق دانشکده علوم‌پزشکی دانشگاه آزاد اسلامی واحد بروجرد رسید.یافته ها بر اساس نتایج کربی بائر،  3 سویه مقاوم به سیپروفلوکساسین در نظر گرفته شد.  حداقل غلظت ممانعت‌کننده سویه‌های مقاوم به دارو بین 32 تا 64 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر و حداقل غلظت کشنده دارو بین 16 تا 32 میلی‌گرم بر میلی‌لیتر بود. با انجام الکتروفورز روی محصولات pcr مشخص شد سویه‌های مورد آزمایش، حاوی ژن mexa ‌کد‌کننده پمپ افلاکس هستند. در محیط آگار‌دار بدون سرترالین، قطر هاله اطراف دیسک سیپروفلوکساسین صفر بود، اما پس از افزودن سرترالین، قطر هاله به 25 میلی‌متر افزایش یافت. همچنین حداقل غلظت ممانعت‌کننده از رشد سیپروفلوکساسین در سویه‌ها قبل از اضافه‌ کردن 2 درصد سرترالین، 128 میکروگرم بر میلی‌لیتر بود که پس از اضافه کردن سرترالین به 4 میکرو‌گرم بر میلی‌لیتر تبدیل شد. نتیجه گیری سرترالین باعث کاهش حداقل غلظت ممانعت‌کننده دارو از طریق کاهش کارایی پمپ افلاکس در باکتری سودوموناس آئروجینوزا می‌شود و مقاومت باکتری را نسبت به آنتی‌بیوتیک سیپروفلوکساسین کاهش می‌دهد.

efflux inhibition in clinical isolates of pseudomonas aeruginosa using sertraline for ciprofloxacin resistance breakdown

background and aim the efflux pump in pseudomonas aeruginosa inhibits the effect of ciprofloxacin by releasing quinolones out of the cell. it is important to find compounds to inactivate or inhibit its activity to continue using the antibiotics. the present study was done to investigate using sertraline as an efflux pump inhibitor in p. aeruginosa to reduce antibiotic resistance.methods & materials p. aeruginosa strains were isolated from clinical sources and identified by routine microbiological methods. resistance of the isolates to ciprofloxacin was evaluated by kirby–bauer test. resistance breakdown was investigated by adding sertraline to the moller hinton agar medium and determining the zone of inhibition of ciprofloxacin. minimum inhibitory concentration (mic) by microplate dilution method and minimum bactericidal concentration (mbc) by culture and mtt method were done for the isolates and atcc 27853. the presence of the efflux pump was evaluated by the phenotypic method using sertraline and serial dilution method of the liquid medium in a microplate, on ciprofloxacin-resistant strains. the presence of the producing gene of this pump was determined by the genotyping method in resistant strains by performing pcr. the standard pao1 strain of p. aeruginosa was used as a positive control.ethical considerations this study was approved by the ethics committee of the faculty of medical sciences of islamic azad university, brojerd branch (code: ir.iau.b.rec.1401.011).results based on kirby–bauer test results, three strains were considered resistant to ciprofloxacin. mic of drug-resistant strains was between 32 and 64 mg/ml and mbc was between 16 and 32 mg/ml. by performing electrophoresis on the pcr products, it was determined that the tested strains contained the mexa gene encoding the efflux pump. in the agar medium without sertraline, the zone of inhibition around the ciprofloxacin disc was zero, but after adding sertraline, the diameter of the halo increased to 25 mm. the minimum inhibitory concentration of ciprofloxacin in the isolates before adding 25 µg of sertraline was 128 µg/ml and after adding sertraline, it was 4 µg/ml.conclusion it was concluded that sertraline inhibited the efficiency of the efflux pump in resistant p. aeruginosa isolates and reduced ciprofloxacin resistance.