|
|
کلونینگ و بیان ژن رمزگذار آنزیم تجزیهکننده ترکیبات آلی فسفره (opd) در باکتری escherichia coli
|
|
|
|
|
نویسنده
|
سجادیان مینو ,حسینی نوه وحید ,طالبی خلیل ,زمانی مریم
|
منبع
|
دانش گياه پزشكي ايران - 1396 - دوره : 48 - شماره : 2 - صفحه:253 -269
|
چکیده
|
کاربرد گستردۀ ترکیبهای آلی فسفرۀ منجر به بروز اثر زیانآور زیستمحیطی بسیاری شده است. استفاده از میکروارگانیسم ها در پالایش و اندازهگیری این ترکیبهای ناگوار بهعنوان یک رویکرد دوستدار محیط زیست و مناسب شناخته شده است. آنزیم ارگانوفسفروس هیدرولاز از آنزیمهای هیدرولیزکنندۀ فسفوتری استری است که در برخی میکروارگانیسم های خاک بهویژه flavobacterium sp.شناسایی شده و قادر به هیدرولیز تعدادی از ترکیبهای فسفرۀ آلی است. در این پژوهش بهینهسازی کدونهای توالی رمزگذار این پروتئین برای بیان در باکتری escherichia coli انجام شد و سپس همراه با پروموتر lac، در وکتور پروموترپروب pth1705 بهصورت ادغام الگوبرداری کلون شد و ترانسفورماسیون در دو سویۀ باکتری e. coli انجام گرفت. محیط کشت معدنی m9 حاوی غلظت 10و 50 میلی گرم در لیتر دیازینون، برای سنجش عملکرد باکتری تراریخت بیانکنندۀ ژن opd (بهصورت in trans) استفاده شد. بررسی منحنی رشد استرین e. coli v103 نشان داد، رشد باکتری در غلظت 50 میلی گرم در لیتر دیازینون تا حد زیادی تحت تاثیر (وجود آفت کش) قرار می گیرد درحالیکه در غلظت 10 میلیگرم در لیتر دیازینون این تاثیر کمتر است. نتایج حاصل از کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا بهعنوان یک روش استاندارد نشان داد، غلظت دیازینون در محیط کشت باکتری، در چهار استرین v100، v101، v102 و v103 پس از 24 ساعت از 10 میلی گرم در لیتر به ترتیب به 6/38، 7/19، 7/09 و 5/74 میلی گرم در لیتر کاهش یافت. این نتایج بیانگر انتقال موفق و نیز بیان ژن مورد نظر در باکتری است و این باکتری نوترکیب مهندسیشده توانایی تجزیۀ ترکیبهای فسفره را دارد.
|
کلیدواژه
|
باکتری تراریخت، تجزیه، ترکیبهای آلی فسفره، کروماتوگرافی مایع با کارایی بالا
|
آدرس
|
دانشگاه تهران, گروه گیاهپزشکی, ایران, دانشگاه تهران, گروه گیاهپزشکی, ایران, دانشگاه تهران, گروه گیاهپزشکی, ایران, دانشگاه مک مستر, گروه زیست شناسی, کانادا
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
Cloning and studing the function of opd gene encoding organophosphorus hydrolase in Escherichia coli
|
|
|
Authors
|
Sajadian Seyedeh Minoo ,Hosseini naveh Vahid ,Talebi Khalil ,Zamani Maryam
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|
|