اثر سوپرناتانت مخمر ساکارومیسس سرویزیه بر ممانعت از رشد باکتری سودوموناس آئروجینوزا و اثر آن بر بیان ژن اگزوتوکسین s در باکتری سودوموناس آئروجینوزا به روش real – time pcr

مقدمه و هدف: ساکارومیسس سرویزیه یکی از انواع مخمرهای پروبیوتیک است که تاثیرات مثبت بر سلامت دارد. سودوموناس آئروجینوزا یکی از باکتری های بیماری زای فرصت طلب بسیار مهم است. اگزوتوکسین s از توکسین ها و آنزیم های ترشحی مهم آن است. هدف از این مطالعه تعیین اثر سوپرناتانت ساکارومیسس سرویزیه بر ممانعت از رشد سودوموناس آئروجینوزا و اثر آن بر بیان ژن اگزوتوکسین s به روش real-time pcr است. مواد و روش ها: کشت سودوموناس آئروجینوزا در محیط brain heart broth صورت گرفت. استخراج total rna باکتری با کیت rna protect bacteria و استخراج cdna با کیت quantitect transcription reverse انجام شد. کشت ساکارومیسس سرویزیه در محیط potato dextrose broth صورت گرفت و سوپرناتانت آن به دست آمد. سه بار آزمایش حداقل غلظت بازدارنده ی رشد(mic) سوپرناتانت علیه سودوموناس آئروجینوزا با روش micro dilution broth انجام شد. سوسپانسیون باکتریایی سودوموناس آئروجینوزا سه بار جداگانه با کشت خالص و سوپرناتانت مخمر مجاور شد و هر بار آزمایش real-time pcr با کیت quantitect syber green pcr جهت سنجش بیان ژن اگزوتوکسین s صورت گرفت. نتایج: حداقل غلظت ممانعت گر رشد (mic) سوپرناتانت علیه سودوموناس آئروجینوزا μg/ml 2048 بود. نتایج آزمایش realtime pcr نشان دهنده ی بازده بیان ژن اگزوتوکسین s در کشت باکتری و سوپرناتانت 77 /1 بود. نتیجه گیری: سوپرناتانت باعث ممانعت از رشد سودوموناس آئروجینوزا شد اما سبب افزایش بیان ژن اگزوتوکسین s در سودوموناس آئروجینوزا گردید، زیرا از غلظتmic سوپرناتانت استفاده شد و عدد بازده بیان ژن بزرگ تر از 1 شد.

The effect of supernatant of Saccharomyces cerevisiae yeast on preventing the growth of Pseudomonas aeruginosa bacteria and its effect on exotoxin S gene expression in Pseudomonas aeruginosa bacteria by Real-Time PCR methodd

Background and Objective: Saccharomyces cerevisiae is one of the probiotic yeasts that has positive effects on health. Pseudomonas aeruginosa is one of the important opportunistic pathogenic bacteria. The purpose of this study was to determine the effect of supernatant of Saccharomyces cerevisiae on preventing the growth of Pseudomonas aeruginosa and its effect on exotoxin S gene expression by RealTime PCR method. Materials and Methods: Pseudomonas aeruginosa was cultured in brain heart broth. Total RNA extraction was done by RNA Protect Bacteria kit and cDNA extraction was performed with QuantiTect Reverse Transcription kit. Saccharomyces cerevisiae was cultured in potato dextrose broth culture media and its supernatant was gained. Minimal Inhibitory Concentration (MIC) test for supernatant against P. aeruginosa was done by micro dilution broth method three times. The bacterial suspension of P. aeruginosa was admixed three times with pure culture, supernatant yeast. Each RealTime PCR test was performed with a QuantiTect SYBER Green PCR kit to measure the expression of Exotoxin S gene. Results: Supernatant Minimal Inhibitory Concentration (MIC) test against Pseudomonas aeruginosa was 2048 micro;g/ml. The results of RealTime PCR test represent the Exotoxin S gene expression efficiency in the culture of bacteria and supernatant was 1.77. Conclusion: Supernatant of Saccharomyces cerevisiae could prevent the growth of Pseudomonas aeruginosa, but increases the expression of Exotoxin S gene in Pseudomonas aeruginosa, because supernatant 1/2 MIC concentrations was used and the gene expression efficiency number was greater than 1.