کلونینگ مولکولی ساب‏یونیت‌های آلفا و بتای هورمون لوتیینیزه با استفاده از توالیIRES در شاتل وکتورPEGFP-N1 و تطابق آن با بانک ژنی

مقدمه و هدف:هورمون‌های گلیکوپروتیینی ترشح‏شده از هیپوفیز قدامی از دو زیرواحد آلفا و بتا با اتصال غیرکوالان تشکیل‏شده‏است، زیرواحد الفا در هورمون‌های این خانواده یکسان است و تفاوت در فعالیت بیولوژیک این دسته ازهورمون‌ها به زیرواحد بتای آنها ارتباط‏دارد. با توجه به عدم دسترسی مناسب به هورمون و امکان ایجاد آلودگی، در این تحقیق تلاش‏شد تا با استفاده از توالیires زیرواحدهای آلفا و بتای این ژن به‏منظور استفاده درمانی، در پلاسمید بیانیpegfp-n1کلون شود.مواد و روش‌ها:تحقیق با طراحی تجربی انجام‏گرفت،به‏منظور کلونینگ زیر واحدهای آلفا و بتای هورمون lh، ابتدا توالی نوکلوتیدی طراحی‏شده در پلاسمید حامل pgem-biسنتز شد. توالی مورد نظر در سایت smai پلاسمیدبیانی pegfp-n1،ساب‏کلون شد. پلاسمید حاصل با انجام هضم آنزیمی و pcr،مورد تایید قرارگرفت.نتایج:آنالیزآنزیمیو pcrنشان‏داد که پلاسمید-?-ires-b pegfp-nl، حاوی توالی صحیحی بوده، با توالی ژن مورد نظر در بانک ژن تطابق‏دارد.نتیجه‏گیری:این پلاسمیدبه دلیل ساختارصحیح برای انتقال به سیستم یوکاریوتیوارزیابی بیان،مناسب است.