تهیه سازه‌های مناسب به منظور بیان ژن اینترفرون گامای انسانی در Leishmania tarentolae

مقدمه و هدف: افزایش کاربردهای درمانی برای اینترفرون گامای انسانی نوترکیب (hrifng) که یک سایتوکین پیش التهابی ضدویروسی است، موجب گسترش روش های بهینه سازی تولید آن شده است؛ در این مطالعه، تولید این گلیکوپروتیین در سیستم یوکاریوتی تک سلولی leishmania tarentolae که از مارمولک tarentolae annularis به دست می آید، برای بیان ژن هترولوگ مورد بررسی قرارگرفته است. مواد و روش ها: به منظور تکثیر cdna ژن ifng از روش rt-pcr روی سلول های تک هسته ای خون محیطی تحریک شده با فیتوهماگلوتینین یک فرد ایرانی سالم استفاده شد و به منظور بیان پروتیین hrifng، cdna تکثیرشده در دو کاست بیانی کلون شد. به نحوی که هر کاست بیانی دارای یک کپی از ژن hifng بود؛ این کاست های بیانی با روش الکتروپوریشن در جایگاه ژن rna ریبوزومی (ssu) l. tarentolae وارد شدند. پس از ترانسفورم، کلون های ترانسفورم شده در حضور آنتی بیوتیک های اختصاصی انتخاب شدند. نتایج: سازه های مورد نیاز بیان اینترفرون گامای انسانی در سلول های l. tarentolae تهیه و به داخل سلول انگل وارد شد و کارایی سازه ها، با تکنیک وسترن بلات تاییدشد.نتیجه گیری: تاکنون انواع مختلفی از سلو ل های پروکاریوتی و یوکاریوتی به عنوان سیستم های بیانی در تولید پروتیین های نوترکیب استفاده شده اند ولی به دلیل ویژگی هایی، اغلب در بیان این گلیکوپروتیین ناموفق بوده اند. سیستم به کار رفته در این مطالعه از خصوصیاتی ویژه ازقبیل سرعت رشد بالا، شرایط کشت ارزان و گلیکوزیلاسیون مناسب گلیکوپروتیین ها بهره مند است که می تواند برای تولید پروتیین نوترکیب به کاررود.