بررسی تاثیر استفاده از محیط کشت حاوی ژل پلاکتی در سلامت سلولی و بیان ژن‌های pax6 و rpe65 در سلول‌های رنگ‌دانه دار شبکیه انسان

مقدمه و هدف: تخریب اپیتلیوم رنگ‌دانه دار شبکیه انسان (hrpe) در خلال برخی اختلالات از جمله افزایش سن با تضعیف شدید در عملکرد گیرنده‌‌های نوری چشم همراه است. پیوند سلولی و بافتی لایه rpe از گزینه‌های درمانی است که در سال‌های اخیر مورد توجه قرار گرفته است. استفاده از ژل پلاکتی تاثیرات مفیدی بر رشد سلول‌‌های مختلف کشت داده شده نشان داده است. این مطالعه به منظور بررسی تاثیر سه غلظت مختلف ژل پلاکتی بر زنده ماندن و بیان ژن‌های pax6 و rpe65  سلول‌های اپیتلیال رنگی شبکیه انسانی کشت شده (hrpe) انجام شد.مواد و روش ها: سلول‌های hrpe استخراج شده از چشم انسان در صفحات حاوی ژل پلاکت (pl) با غلظت‌های مختلف (10٪،20٪ و30٪) کشت داده شدند. زنده ماندن سلول‌ها با آزمون mtt مورد آزمایش قرار گرفت و بیان ژن های rpe65 و pax6 با استفاده از روش realpcr انجام شد. نتایج با نمونه کنترل کشت داده شده در fbs مقایسه گردید. میزان تغییرات بیان هر ژن در تیمارهای مختلف نسبت به کنترل و با توجه به ژن داخلی gapdh بر طبق روش2∆∆ct مقایسه شد و نتایج به دست آمده در قالب نمودار ستونی با یکدیگر مقایسه شدند.نتایج: هفت روز پس از شروع کشت عملکرد و رشد سلول‌‌های rpe بصورت معنی داری (0.05>p) در ژل30%  پلاکتی بالاتر از ژل پلاکتی10% بود. بیان ژن rpe65 نیز در کشت‌های تیمار شده با ژل 20 و 30% بصورت معنی داری (0.05>p) بیشتر از کشت‌های حاوی ژل سرم گاوی بود، اما تفاوت آماری از نظر بیان ژن pax6 بین نمونه ‌های کشت داده شده در درصد‌های مختلف از ژل مشاهده نشد.نتیجه‌گیری: مطالعه حاضر نشان داد که استفاده از ژل پلاکتی سبب بهبود ماندگاری و حفظ ماهیت سلول‌‌های rpe کشت داده شده می‌شود. نتایج این مطالعه برای بهینه سازی برنامه ریزی سلول درمانی در آینده امیدوارکننده است.

The effect of platelet gel-containing culture medium on the viability and expression of PAX6 and RPE65 genes in human retinal pigment epithelial cells

Background and Objective: Degradation of human retinal pigment epithelium (hRPE) during some disorders such as aging is associated with severe impairment of ocular optical receptor function. Cellular and tissue transplantation of RPE layer is one of the treatment options that has been considered in recent years. The use of platelet gel has shown beneficial effects on the growth of various cultured cells.This study was conducted to investigate the effects of three different concentrations of platelet gel on the viability and the expression of PAX6 and RPE65 genes of cultivated RPE cells.Materials and Methods: hRPE cells extracted from the human eye were cultured in plates containing platelet gel (PL) of different concentrations (10%, 20%, and 30%). Cells viability was tested by MTT test and the expression RPE65 and PAX6 genes were analyzed by using real time PCR. The number of expression changes of each gene in different treatments compared to the control and according to the internal GAPDH gene was calculated according to the 2∆∆Ct method and the results were compared with each other in a bar chart.Results: After 7 days, cultivated hRPE cells in culture media containing 30% PL showed a high rate of viability in comparison with those cultured in 10% PL (P<0.05). RPE65 gene expressions in cell cultures treated with 20% and 30% PL were higher than controls (P<0.05). However, there was no significant difference in the expression of PAX6 gene between the cell cultures treated with 20% and 30% platelet gels.Conclusion: our results showed that using platelet gels in hRPE cell cultures can improve cell viability and identity, which can be promising for optimizing future clinical cell therapy strategies.