تولید قطعات آنتی‌بادی نوترکیب انسانی تکزنجیره ضد مولکول 4-1bb در باکتری اشریشیاکلی

مقدمه و هدف: آنتی بادیهای منوکلونال علیه 4-1bb در درمان بیماریهای اتوایمیون، عفونتهای ویروسی و همچنین ایمونوتراپی سرطانها کاربرد دارند. آنتی بادیهای منوکلونال موشی به علت وجود مشکلاتی از قبیل ایمنی زایی و اندازه بزرگ، کارایی محدودی در بالین دارند. قطعات آنتی بادی کاملاً انسانی از قبیل قطعات scfv میتوانند جایگزین خوبی برای کاربردهای ایمنی درمانی باشند. هدف از این مطالعه تولید قطعات آنتی بادی تکزنجیرهای انسانی بر ضد 4-1bb به منظور استفاده از آن در ایمنی درمانی سرطان است.مواد و روش ها: در مطالعهی حاضر ژن scfv انسانی علیه 4-1bb در وکتور pet22(+) کلون شده و در باکتری e. coli top 10f بیان شد. تائید اولیه scfv تولید شده توسط وسترن بلات و الایزا انجام شد. در ادامه عملکرد این آنتی بادی در تحریک سلولهای بیان کننده 4-1bb با بررسی میزان بیان cd69 در سطح سلولها، بیان mrna و تولید پروتئینil2 مورد ارزیابی قرار گرفت.نتایج: نتایج این پژوهش نشان دادند که ژن scfv طراحی شده در میزبان باکتریایی، بیان شده و قادر به شناسایی آنتیژن 4-1bb است. تیمار سلولهای ccrfcem با scfv ضد 4-1bb موجب القای تولید سایتوکاین il2 شده و بیان cd69 را بر سطح سلول های هدف افزایش می دهد.بحث و نتیجه گیری: آنتی بادی تک زنجیره ای انسانی علیه 4-1bb به خوبی در سیستم بیانی باکتری e. coli تولید شده و قادر به شناسایی آنتی ژن هدف و فعالسازی سلولهای ccrfcem است. از این آنتی بادی نوترکیب میتوان در مطالعات بعدی جهت فعالسازی سلولهای t در روش های سلول درمانی سرطان استفاده نمود.

Production of recombinant human single chain anti4-1BB molecule antibody in Escherichia coli

Background and Objective:Monoclonal antibodies against 4-1BB have been used in the treatment of autoimmune diseases, viral infections, as well as immunotherapy of cancers. Because of their foreign nature and the large size, the murine monoclonal antibodies have restricted efficacy in clinical use. Fully human antibody fragments such as scFv fragments can be an attractive alternative for immunotherapeutic applications. The aim of this study was the production of human scFv antibodies against 4-1BB in order to use it in cancer immunotherapy.Materials and Methods:In this study, anti4-1BB scFv gene was cloned in pET22(+) and expression in E. coli TOP 10F.The initial analysis of the gene product was performed by western blot and ELISA. Furthermore, its efficacy in stimulating 4-1BB expressingcells was evaluated by assessing the cell surface expression of CD69 and IL2 mRNA and protein expression.Results:The results showed that the designed scFv gene was well expressed in E. coli and specifically reacts to the target antigen. The CCRFCEM cell’ treatment with anti4-1BB scFv induced IL2 production and increased CD69 expression on the surface of target cells.Conclusion: The anti4-1BB singlechain antibody was successfully expressed in E. coli expression system and is able to detect target antigen and activate CCRFCEM cells. This recombinant antibody could be useful for T cell activation in cancer cell therapy approaches.