بیان ژن fsh انسانی در سلول تخمدان همستر چینی و بررسی فعالیت آن در مدل حیوانی رت

مقدمه و هدف: fsh هورمون گلیکوپروتئین هترودایمری است که در رشد و بلوغ اندام های جنسی و صفات ثانویه موثر است. گنادوتروپین های قابل تزریق نقش پیشرو در درمان ناباروری داشته اند. تولید fsh در داخل کشور یکی از اهداف مهم پیرامون این دارو است. هدف از این مطالعه امکان تولید آزمایشگاهی fsh نوترکیب می باشد.مواد و روش ها: وکتور حاوی زیر واحد آلفا و بتای ژن fsh انسانی در باکتری dh5α انتقال و پلاسمید جداسازی و توسط لیپوفکتامین 2000 به سلول تخمدان همستر چینی ترانسفکت شد. سلول ها بوسیله نئومایسین به مدت 10 روز تیمار و سلول های ترانسفکت شده انتخاب شدند. بیان پروتئین بوسیله الایزا مورد بررسی قرار گرفت. محصول با روش کروماتوگرافی افینیتی خالص شد. جهت محاسبه راندمان تخلیص، غلظت پروتئین قبل و بعد از کروماتوگرافی به وسیله الایزا مورد سنجش قرار گرفت. جهت تائید خلوص پروتئین از روش sds-page و وسترن بلاتینگ استفاده شد. سپس به رت ماده تزریق و عملکرد پروتئین بررسی شد.نتایج: بیان پروتئین با استفاده از تست الایزا در 450 نانومتر miu/ml 43.538 تائید شد. در مرحله تخلیص با روش کروماتوگرافی افینیتی، پیک مربوط به fsh در بازه زمانی حدود 7.9 دقیقه مشاهده و راندمان تخلیص 70% محاسبه شد. وجود باند 45 کیلودالتونی بر روی ژل و غشای pvdf پس از تخلیص، حضورfsh را تائید نمود. افزایش وزن تخمدان بعد از تزریق، عملکردی بودن پروتئین را تائید نمود. نتیجه گیری: در حال حاضر تولید هورمون های نوترکیب از نیازهای کشور محسوب می شود، بنابراین دست یابی به این هدف ارزشمند نیاز به برنامه ریزی بلندمدت دارد و ما در این پژوهش سعی نمودیم این مسیر را به منظور تولید هورمون fsh انسانی به عنوان یک داروی نوترکیب موثر در درمان ناباروری هموار نماییم.