آنتاگونیست رسپتور اینترلوکین-1 انسانی: کلونینگ، بیان و بهینه سازی در میزبان E.coli

مقدمه و هدف: آنتاگونیست رسپتور il-1 (il-1ra) یک سایتوکاین ضد التهابی قوی است که باعث محدود کردن اثرات التهابی مربوط به اینترلوکین-1 ((il-1 می شود. بعلت تشابه ساختمانی با il-1، il-1ra به طور رقابتی به رسپتور il-1 متصل می شود ولی هیچ سیگنالی را القا نمی کند. بنابراین در درمان افراد مبتلا به بیماری های التهابی نظیر آرتریت روماتویید بکار می رود. هدف از مطالعه حاضر کلون کردن، بیان و بهینه سازی بیان این پروتیین در e. coli می باشد.روش کار: دراین مطالعه تجربی قطعه ی ژنی سنتزی مربوط به il-1ra به وسیله pcr تکثیر داده شد. پس از برش دو آنزیمی، این قطعه در وکتور بیانی pet28a کلون گردید. بیان ژن مورد نظر ابتدا در سطح mrna به روش rt-pcr و سپس در سطح پروتیین به روش sds-page مورد برسی قرار گرفت و برای تایید پروتیین بیان شده از وسترن بلات استفاده گردید. بهینه سازی بیان نیز در غلظت های مختلف iptg و مدت زمان های مختلف بعد از القا صورت گرفت.نتایج: به کمک روش کلنی-pcr و هضم دو آنزیمی، کلون شدن قطعه ی ژنی مورد نظر در وکتور بیانی pet28a مشخص شد. رونویسی از ژن کلون شده و بیان بالای پروتیین نوترکیب به ترتیب به روش rt-pcr و sds-page مشاهده شد. نتیجه ی حاصل از الکتروفورز پروتیین نیز با روش وسترن بلات تایید گردید. میزان بیان در غلظت های مختلف القا کننده و مدت زمان پس از القا بهینه سازی گردید.نتیجه نهایی: نتایج حاصل از مطالعه نشان دهنده ی بیان بالای این پروتیین در میزبان e.coli به وسیله وکتور بیانی pet28a بود. این مطالعه هم چنین نشان داد رابطه مستقیمی با افزایش بیان و مدت زمان برداشت سلول ها پس از القا وجود دارد، لذا القا با غلظت 1 میلی مولار iptg به مدت یک شب برای بیان بالای پروتیین پیشنهاد می گردد.