مهار مسیر TGF-b به‌وسیله تکنیک RNAi در سلول‌های بنیادی خون‌ساز کشت داده شده روی داربست سه بعدی DBM

زمینه و هدف: خون بندناف در پیوندمغز استخوان، به‌علت دوز پایین سلول‌های cd34+ دارای محدودیت‌هایی است که می‌بایست این سلول‌هامورد تزاید قرار گیرند. تکثیر سلول‌های بنیادی با استفاده از افزایش فعالیت خودتکثیری آن‌ها در شرایط آزمایشگاهی روی داربست dbm (ماتریکس استخوانی معدنی‌زدا شده) پوشیدهشده با سلول‌های پروژنیتور مزانشیمی یعنی سلول‌های بنیادی سوماتیک غیر محدود شده (ussc) پیشنهاد می‌شود. مسیر tgf-b از عوامل مهممهاری برای فعالیت خود تجدید شوندگی سلول‌های بنیادی است که در این تحقیق از هم‌زمانیکشت برون تن (ex vivo) و مهار مسیر tgf-b با کمک تکنیک rnai استفاده شد. روش بررسی: سلول‌های ussc، از خونبندناف جدا شده و سپس روی داربست dbm و هم کف پلیت، به عنوان لایه مغذی، پوشش دادهشدند. سلول‌های cd34+ با روش magnetic-activated cell sorting (macs) از جفت انسانی تخلیص و درشرایط دو بعدی و سه بعدی هم کشتی، با sirna علیه tgfbr2 تیمار شدند. میزان سرکوب بیان ژن مربوطه باreal-time pcr  کمی بررسی شدند. در نهایت شمارش سلولی،فلوسایتومتری و فعالیت کلنی‌زایی سلول‌ها مورد ارزیابی قرار گرفت. یافته‌ها: کشت سه بعدی به‌همراه مهار ژن tgfbr2 موجب افزایش قابل توجه 7/0±41 برابر سلول‌های cd34+ شد. ولیافزایش نسبت تزاید در دو بعدی ساده بیش از سه بعدی بود و نیز بیش‌ترین مهار بیانژن، بیش‌ترین افزایش در مارکر سطحی با آنالیز فلوسایتومتری در حالت کشت دو بعدیساده نشان داده شد (05/0p<). نتیجه‌گیری: بنابرایناز نظر موثر بودن سیستم انتقال rnai، کشت دو بعدی ساده نسبت به سه بعدی کارآمدتر بود به‌طوری که سلول‌هاآزادی کم‌تر داشته و بیش‌تر با سلول‌های لایه مغذی درگیر بودند.