بهینه‌سازی تولید فعال‌کننده پلاسمینوژن بافتی نوترکیب در انگل لیشمانیای غیر بیماری‌زا با طراحی دو سازۀ ژنی

زمینهو هدف: پروتیین فعال‌کنندهپلاسمینوژن بافتی نوترکیب (rt-pa) یکیاز مهم‌ترین ترکیبات ضد لخته می‌باشد که در درمان سکته‌های قلبی و مغزی از اهمیتبالایی برخوردار است. تاکنون روش‌های مختلفی برایتولید پروتیین‌های نوترکیب هترولوگ با استفاده از میزبان‌های پروکاریوتیک ویوکاریوتیک مورد بررسی قرار گرفته است.اخیراً انگل لیشمانیا تارنتولا leishmania tarentolae (l. tarentolae) به دلایل متعددی از جمله عدم بیماری‌زایی وشرایط ویژه آن در تولید پروتیین‌های پیچیده اهمیت زیادی یافته است. روشبررسی: در تحقیق حاضر به‌منظوربهینه‌سازی میزان بیان t-pa نوترکیبانسانی با استفاده از سلول l. tarentolae دو سازهبیانی که هر یک حاوی دو کپی از cdna t-pa بودطراحی و ساخته شد. این سازه‌ها از طریق الکتروپوریشن به سلول‌های l .tarentolae وارد و در ژنوم انگل ادغام گردیدند. پس ازانتخاب کلون‌های ترانسفورم شده، بیان t-pa ترشح شده بهمحیط کشت سلولی و میزان فعالیت بیولوژیکی آن توسط آزمون‌های وسترن بلات و کرومولیز(chromolize) بررسی گردید. یافته‌ها: ظهورباند kd64 در غشاء نیتروسلولز حضور t-pa در محیط کشتسلول‌های l.tarentolae ترانسفکت شدهرا تایید کرد. نتایج آزمون علاوه بر تایید حضور پروتیین t-pa فعال درسوپ سلولی نشان داد که میزان فعالیت پروتیین ترشح شده در سلول‌های ترانسفکت شده بایک سازه، iu/ml375 و درسلول‌های ترانسفکت شده با هر دو سازه برابر با iu/ml480 می‌باشد. نتیجه‌گیری: در این مطالعه میزان فعالیت t-pa بیانشده در محیط کشت سلول‌های ترانسفکت شده، دست‌کم هفت برابر بیشتر از مقدار گزارششده در مطالعات پیشین در این میزبان و نیز بیشتر از عدد گزارش شده در بسیاری ازمیزبان‌های یوکاریوتیک دیگر می‌باشد.