ارایه روش مبتنی بر مرکزگریزی متعدد برای تهیه گلبول‌های سفید نشان‌دار با تکنزیوم

زمینه و هدف: اسکن هسته‌ای گلبول سفید نشان‌دار در ایران در دسترس نیست. برای استخراج گلبول سفید از خون کامل از نوعی نشاسته (hetastarch) با غلظت 10% استفاده می‌شود که به‌صورت گندزدایی شده در ایران با غلظت مورد نظر در دسترس نیست. از این‌رو در این مقاله یک روش مبتنی بر دستگاه مرکز گریز معرفی می‌شود.روش بررسی: این مطالعه راه‌اندازی روش از اردیبهشت تا تیر 1397 در بیمارستان امام‌خمینی تهران انجام شد. بدین منظور ml 56 خون در سرنگ حاوی ml 6 اسید سیترات دکستروز از بیمار دریافت می‌شود و طی چهار مرحله مرکزگریزی رسوب گلبول سفید و پلاسما فاقد سلول تخلیص می‌گردد. گلبول سفید با ترکیب تکنزیوم 99m هگزامتیل پروپیلن آمین اکسایم نشان‌دار می‌شود. مجددا طی دو مرحله مرکزگریزی تکنزیوم آزاد از گلبول سفید نشان‌دار جدا می‌گردد. در نهایت گلبول سفید نشان‌دار در ترکیب پلاسما فاقد سلول به بیمار باز تزریق می‌شود. توزیع رادیو دارو در تصویربرداری‌های 42 ساعته که به‌دلایل بالینی انجام شده است به‌طور نمونه ارایه می‌شود.یافته‌ها: گلبول‌های سفید به‌خوبی از گلبول‌های قرمز و پلاسما حاوی پروتیین جدا می‌شود. محصول نهایی خلوص رادیو شیمیایی بیش از 95% دارد. در تصویربرداری دو و چهار ساعته اعضای هدف طحال و کبد، جذب در مغز استخوان مختصر، ترشح رادیو دارو در کلیه‌ها و روده‌ها محدود و برداشت تکنزیوم آزاد در تیرویید و معده ناچیز می‌باشد.نتیجه‌گیری: با روش مرکزگریزی مکرر می‌توان اسکن گلبول سفید نشان‌دار را در بالین به‌طور موثر به‌کار گرفت.

A multi-step centrifuge method for extraction of leucocytes and preparation of Tc-HMPAO labeled leucocytes

Background: Labeled leucocytes could be used for localization of infection foci after surgeries or in inflammatory diseases including inflammatory bowel diseases. Extraction of leucocytes needs 10% Hetastarch which is not available in Iran. We provide a method employing multiple centrifuges to extract and label leucocytes with TcHMPAO.Methods: The study was conducted from April to June 2018 in the Nuclear Medicine Unit of Valiasr Hospital. Leucocytes were extracted from a 60 ml blood sample anticoagulated with Acidcitratedextrose through fourstep centrifugation as below: 1whole blood was centrifuged at 1k cycle per minute (CPM) for eight minutes to precipitate red blood cells (RBC). Supernatant including RBC free plasma, WBC, and platelet was extracted for the next step. 2WBC was precipitated at 1.8k CPM for five minutes and plateletrich plasma (PRP) as supernatant. 3 PRP was centrifuged at 3k for five minutes and cellfree plasma (CFP) was extracted as supernatant, and 4 precipitate WBS at step two was washed with saline and centrifuged at 0.5k CPM to achieve washed WBC. Then the leucocytes were labeled with 40 mCi TcHMPAO through 15 minute incubation at 3738 degrees centigrade. The extra free pertechnetate was eliminated using two additional centrifugation steps as follows: 10.5k CPM for five minutes to dispense free pertechnetate, and 20.5 for five minutes to achieve high radiochemical purity labeled WBC. Finally, the labeled WBC was resuspended in CFP and reinjected to the patient. Imaging at 24 hours was done. The pathology and imaging of labeled WBC distribution are reportedResults: No RBC was detected in microscopy. The majority of the leucocytes were lymphocytes with rare accompanying platelets. The radiolabeling efficiency of the procedure was higher than 40%. The viability test indicated more than 80% of viable cells. The radiochemical purity of the final product was more than 95%. Two to four hours after injection, low background images were acquired. The liver and spleen were target organs with lowgrade urinary, thyroid, and GI activity.Conclusion: Employing multistage centrifugation, TcHMPAO labeled leucocyte scan could be efficiently performed.