تهیه آنتی‌بادی زنجیره سنگین پلی‌کلونال علیه پروتیین انتقال‌دهنده روی slc39a6 و کاربرد آن در تست‌های تشخیصی

زمینه و هدف: پروتیین slc39a6 (solute carrier family 39) یا liv1 یک پروتیین انتقال‌دهنده روی می‌باشد که در سرطان‌های استروژن مثبت مانند سرطان سینه بیان بیش‌ازحد دارد. افزایش بیش‌ از حد غلظت روی می‌تواند محرک تقسیم سلولی نامنظم و سرطان و متاستاز شود. بنابراین مهار پروتیین‌های انتقالی روی می‌تواند در درمان سرطان موثر باشد. پروتیین liv1 می‌تواند به‌عنوان یک نشانگر تشخیصی مناسب سرطان نیز در روش‌های آزمایشگاهی مورد استفاده قرار گیرد. مطالعه حاضر جهت تهیه پلی‌کلونال آنتی‌بادی شتری برای شناسایی پروتیین liv1 در سطح سلول صورت گرفته است.روش بررسی: مطالعه پژوهشی حاضر در انستیتو پاستور ایران، از مهر 1397 تا اسفند 1398 انجام شد. در ابتدا سازه ژنی بیانی حاوی liv1 انسانی تهیه و به باکتری e.coli bl21 انتقال داده شد و بیان این پروتیین با iptg القا شد و سپس به‌وسیله ستون کروماتوگرافی تمایلی، پروتیین نوترکیب تخلیص گردید. سپس حیوان شتر یا استفاده از این پروتیین ایمن‌سازی شد. سرم حیوان ایمن شده جدا گردید و عملکرد پلی‌کلونال آنتی‌بادی در تست‌های تشخیصی الایزا وسترن بلات و فلوسیتومتری در شناسایی پروتیین liv1 مورد ارزیابی قرار گرفت.یافته‌ها: نتایج نشان دادند که پروتیین liv1 به‌خوبی تخلیص شده است و شتر علیه این پروتیین ایمن شده است. با توجه به نتایج، وسترن بلات، الایزا و فلوسایتومتری نشان داده شد این سرم قابلیت اتصال و شناسایی پروتیین liv1 را دارا می‌باشد.نتیجه‌گیری: در این پژوهش نشان داده شد که آنتی‌بادی پلی‌کلونال شتری قابلیت استفاده در روش‌های آزمایشگاهی را دارد و می‌تواند برای تست‌های ایمونولوژی و کاربردهای درمانی مورد توجه قرار گیرد.

Preparation of heavy chain polyclonal antibody against zinc transporter SLC39A6 and its diagnostic application

Background: SLC39A6 Protein (solute carrier family 39) or LIV1 is a zinc transporter protein that is overexpressed in positive estrogen cancers such as breast cancer. The LIV1 protein transfer zinc into the cytoplasm through the plasma membrane. Today it is known that just as a decrease in the concentration of zinc in the cell can cause cancer, an excessive increase in the concentration of zinc can also stimulate irregular cell division and caused cancer. Thus, inhibition of zinc transporter protein may play a role in preventing malignancies and metastasis. It can also be used as a diagnostic marker in the diagnosis of cancers in various laboratory methods. The present study was performed to prepare a polyclonal camel antibody for the detection of LIV1 protein at the cell surface.Methods: This study was started in the Pasture Institute of Iran in 2018 September and finished in February 2020. An expression construct containing the human LIV1 gene was prepared and transferred to the E.coli BL21 by chemical (CaCl2) and heat shock method. The expression of the protein was induced by IPTG and then protein was purified by affinity (NiNTA) chromatography. After preparing recombinant protein one female camel was immunized, 6 times at two weeks intervals with Freundchr('39')s adjuvant. After immunization, the isolated polyclonal antibody was evaluated by ELISA, western blotting and flow cytometry in the detection of LIV1 protein.Results: The result showed that LIV1 protein was well purified and also the camel polyclonal antibody was able to detect LIV1 protein in ELISA, western blot and also it can detect LIV1 on the cell surface as shown by flow cytometry test.Conclusion: In recent years, LIV1 has been shown to be a good candidate as a marker in breast cancer, so polyclonal antibodies against LIV1 can be used for early detection of breast cancer by various diagnostic methods. In this study, it has been shown that polyclonal camel antibodies can be used in laboratory methods and can be considered for immunological tests and therapeutic applications.