تنوع ژنتیکی ژن استافیلوکوآگولاز ایزوله‌های استافیلوکوکوس اورئوس مقاوم به متی‌سیلین جدا شده از عفونت‌های ادراری و خون

زمینه و هدف: استافیلوکوکوس اورئوس از عوامل بیماری زای متداول در انسان است که طیف گسترده ای از بیماری ها را ایجاد می کند. آنزیم کوآگولاز از عوامل مهم بیماری زای این باکتری می باشد. همچنین بررسی تنوع ژنتیکی ژن کدکننده این آنزیم (coa) یکی از روش های مولکولی تعیین تیپ ایزوله های استافیلوکوکوس اورئوس می باشد.روش بررسی: در این مطالعه مقطعی، از اسفند 1396 تا مهر 1397، 150 نمونه استافیلوکوس اورئوس جدا شده از نمونه های ادرار و خون از بیمارستان های آموزشی الزهرا و امام حسین (ع) دانشگاه علوم پزشکی اصفهان مورد مطالعه قرار گرفتند. پس از تایید نوع باکتری نمونه با قطعه ژنومی coa، برای تعیین تیپ کوآگولاز منطقه بسیار متغیر ژن این آنزیم در واکنش polymerase chain reaction (pcr) تکثیر و سپس مورد هضم آنزیمی با استفاده از آنزیم اندونوکلئاز محدودگر alui قرار گرفت و تنوع طول قطعات هضم آنزیمی مورد بررسی قرار گرفت.یافته ها: از 150 نمونه 45 نمونه استافیلوکوکوس اورئوس با تست های بیوشیمیایی تایید و از این تعداد 36 (80%) نمونه ها حامل ژن کوآگولاز بودند. در بین الگوهای pcr، الگوی bp680 در 20 نمونه و الگوی bp750 در 16 نمونه به دست آمدند. پس از هضم آنزیمی برای آزمون restriction fragment length polymorphism (rflp)، چهار الگو به دست آمدند که الگوی 280+400 در 16 نمونه (44/4%)، الگوی 280+470 در 7 نمونه (19/4%)، الگوی 340+340 در 6 نمونه (16/6%)، الگوی بدون هضم 750 در 7 نمونه (19/6%) می باشند.نتیجه گیری: با استفاده از آزمایشات صورت گرفته مشخص گردید که الگوی pcrrflp، 280+400 جفت بازی الگوی غالب در نمونه های استافیلوکوکوس اورئوس جدا شده در اصفهان می باشد.

Genetic diversity of Staphylocoagulase genes (Coa) among methicillin-resistant Staphylococcus aureus isolates at clinical specimens of blood and urinary infections

Background: Staphylococcus aureus is a common pathogen in human that can be the cause of a wide range of infectious diseases including bacteremia, pneumonia, cellulitis, and osteomyelitis and skin and soft tissue infections. The coagulase enzyme is one of the most important virulence factors of this bacterium. The polymerase chain reactionrestriction fragment length polymorphism (PCRRFLP) Coa pattern is one of the molecular base typing methods. Molecular typing plays an important role in epidemiological studies of nosocomial infection, such as methicillinresistant Staphylococcus aureus (MRSA) infection. The PCRRFLP Coa gene technique provides a useful preliminary method to monitor variations in MRSA populations. We were done CoaRFLP typing according to the method of Hookey et al., with some modifications.Methods: In this crosssectional study, onehundred fifty isolates of S. aureus from urine and blood samples of patients that collected from educational hospitals of Imam Hossein and Al Zahra Isfahan University of Medical Sciences, Iran, from February 2018 to October 2018 were analyzed. After bacterial confirmation of isolates by Coa gene in polymerase chain reaction (PCR) technique, to perform coagulase gene typing, the repeated units encoding hypervariable regions of the coagulase gene of S. aureus were amplified by PCR. This was followed by AluI restriction enzyme digestion and analysis of restriction fragment length polymorphism (RFLP) patterns.Results: Of 150 samples, 45 isolated of S. aureus were confirmed by biochemical methods. Of previous positive samples, 36 (80%) isolates carried Coa gene. Two different genotypes of Coa gene were obtained that include bp680 fragment in 20 specimens and bp750 fragment in 16 specimens. After enzymatic digestion by AluI restriction enzyme for RFLP, four different restriction patterns were obtained that including, the 280+400 pattern in 16 specimens (44.4%), 280+470 pattern in 7 specimens (19.4%), 340+340 pattern in 6 specimens (16.6%) and 750 patterns without digestion were in 7 specimens (19.6%).Conclusion: Using the present experiments, it was determined that the PCRRFLP pattern, 280+400, was the dominant pattern in the Staphylococcus aureus samples isolated in Isfahan.