مطالعه اثر microrna-125 بر بیان ژن‌ مولکول چسبان اینتگرین بتا 2 و میزان چسبندگی سلول‌های اندوتلیال ایزوله‌شده از آئورت به مونوسیت انسان

زمینه و هدف: پاسخ های مرتبط با سیستم ایمنی در سلول های عروقی ممکن است شامل افزایش بیان مولکول های چسبان، رولینگ و نفوذ لکوسیت باشد. بررسی وقایع سلولی و مولکولی درگیر در فرآیند رولینگ برای درمان یا پیشگیری تنگی عروق به ویژه در شریان های کرونری مفید است. mirnaها، rna های غیر کدکننده کوچک تک رشته ای با حدود 23-19 نوکلئوتید می باشند. هدف این مطالعه بررسی تاثیر سرکوب microrna-125 بر چسبندگی سلولی در فرآیند رولینگ به منظور کاهش یا مهار تنگی عروق در افراد مستعد بود. روش بررسی: در این مطالعه تجربی که از تیر تا دی 1396 در مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی دانشکده پیراپزشکی دانشگاه علوم پزشکی ایران انجام گرفت، نمونه های بافت آئورت از افراد سالمی که به هر دلیل دچار مرگ مغزی شده و مشمول اهدای قلب و سایر نسوج بودند، از بخش جراحی واحد فرآهم آوری اعضای پیوندی بیمارستان دکتر مسیح دانشوری تهیه و با رعایت شرایط کاملا استریل در کوتاه ترین زمان ممکن به مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی منتقل شد. سلول های اندوتلیال از آئورت با استفاده از کلاژناز و مونوسیت ها با استفاده از کیت rosettesep kit (stemcell technologies, vancouver, canada)، از خون کامل جدا شدند. microrna-125 با استفاده از نانو ذره polyethylenimine (pei) به درون سلول های اندوتلیال منتقل شدند. سطح بیان مولکول چسبان اینتگرین بتا 2 (itgb2) با روش quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qrt-pcr) و میزان چسبندگی سلول های اندوتلیالمونوسیت با cytoselect trade; leukocyteendothelium adhesion assay kit (cell biolabs, san diego, ca, usa) ارزیابی شد. یافته ها: براساس نتایج سطح بیان ژن اینتگرین بتا 2 (itgb2) و چسبندگی سلول های اندوتلیالمونوسیت تحت درمان با microrna-125 در مقایسه با نمونه های کنترل به طور معناداری کاهش یافت (به ترتیب 0/008=p و 0/02=p) که در نتیجه منجر به کاهش یا تعدیل فرآیند رولینگ می شود.نتیجه گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که microrna-125 میزان بیان مولکول چسبان itgb2 و چسبندگی سلول های اندوتلیال را به طور چشمگیری کاهش داد.

The effect of microRNA-125 on the adhesion molecule expression of integrin beta2 and adhesive determination of endothelial cells isolated from human aorta to monocyte

Background: The immunemediated responses in vascular cells may include the increased expression of endothelial adhesion molecules, leukocyte rolling and infiltration, cellular lipid dysregulation and vascular smooth muscle cells (VSMCs) differentiation. Investigating the cellular and molecular events involved in the rolling process is useful for treatment or prevention of the vessel stenosis especially in coronary arteries. MiRNAs are small and singlestranded noncoding RNAs with about 1923 nucleotides. In this study, the role of microRNA125 was predictably selected and experimentally investigated on the changes of expression level of adhesion molecule in endothelial cells isolated from human aorta and on the monocyte cells isolated from whole blood human with endothelial cells adhesion. The aim of this study was to determine the effect of miRNA125 repression on cell adhesion in leukocyte rolling process to reduce or suppress artery stenosis in susceptible individuals.Methods: This experimental study was performed in CellularMolecular Research Center of Iran University of Medical Sciences, Tehran, Iran from July to December 2017. Normal aortic samples were prepared from subjects with brain death in Masih Daneshvari Hospital and under strictly sterile conditions, it was transferred as soon as possible. The endothelial cells were isolated from aorta of subjects with brain death using collagenase. The monocytes were isolated from whole blood. The microRNA125 was transfected into ECs with use of polyethyleneimine (PEI). The expression level of adhesion molecule and monocyte recruitment were identified by quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRTPCR) technique and CytoSelect trade; leukocyteendothelium adhesion assay kit (Cell Biolabs, San Diego, CA, USA), respectively.Results: The results showed the microRNA125 suppresses significantly integrin beta 2 (ITGB2) expression level (P=0.008). In addition, the monocyteEC adhesion was shown in the aortic miRNAtreated endothelial cells. The adhesive rate between cells reduced significantly with microRNA125 as compared with miRsynthetic (P=0.02). Thereby, there were the associations between the ITGB2 and miR125a. Downregulation of ITGB2 may be reduced the adhesion of endothelial cells and moderating the process rolling.Conclusion: This study suggested that the suppression of leukocyte rolling process might be more due to the function of ITGB2. However, the functional effects of this miRNA should be directly investigated on the studied gene.