مقایسه روش‌های Mtt، تریپان‌بلو و سنجش کلونوژنیک در تعیین بقای رده سلولی سرطان تیرویید آناپلاستیک انسانی

زمینه و هدف: ارزیابی بقای سلولی در مطالعات دارویی و سرطان برای تعیین حساسیت سلولی مهم و تعیین کننده نتیجه درمان است. بنابراین روش های مختلفی استفاده می گردد که نقطه پایانی متفاوتی را ارزیابی می کنند. تعیین وجود همبستگی بین روش ها دارای اهمیت می باشد. در این مطالعه، حساسیت روش های رنگ سنجی 3-(4و5-دی متیل تیازول-2-ایل)2-و5-دی فنیل تترازولیوم برماید (mtt)، تریپان بلو و سنجش کلونوژنیک در تعیین بقای رده سلولی سرطان تیرویید آناپلاستیک ارزیابی گردید.روش بررسی: مطالعه تجربی کنونی از مهر تا اسفند 1395 در مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی دانشگاه علوم پزشکی گیلان انجام پذیرفت. رده سلولی سرطان تیرویید آناپلاستیک انسانی کشت شده در محیط dulbecco's modified eagle's medium (dmem) حاوی 10% fetal bovine serum (fbs)، به مدت 24 ساعت با ملاتونین تیمار گردید، سپس بقای سلولی توسط تست های mtt، تریپان بلو و سنجش کلونوژنیک بررسی و از راندمان کشت و درصد کسر بقا جهت رسم منحنی بقا در سنجش کلونوژنیک استفاده گردید. یافته ها: غلظت ملاتونین در نقطه ic50 در روش های mtt، تریپان بلو و سنجش کلونوژنیک به ترتیب، شامل 0/117±4/794، 0/894±4/375 و 0/326±2/246 میلی مولار بود که مقایسه مقادیر ic50 در آزمون mtt و تریپان بلو اختلاف معناداری را نشان نداده (0/6446=p)، در حالی که بین mttسنجش کلونوژنیک (0/0032=p)، تریپان بلوسنجش کلونوژنیک (0/0078=p) اختلاف معنادار بود. نتایج تحلیل رگرسیون بقای سلولی، نشان دهنده همبستگی خطی، مثبت و معنادار بین روش ها بوده که بین روش های mtt و تریپان بلو همبستگی بیشتر بود (0/99=r،p<0.001 ).نتیجه گیری: نتایج نشان دادند، هر سه روش برای تعیین سمیّت سلولی سرطان تیرویید آناپلاستیک موثر بوده و روش های mtt و تریپان بلو نسبت به سنجش کلونوژنیک، حساسیت بالاتری دارند.

Comparison of MTT, trypan blue, and clonogenic assay, to determine the viability in human anaplastic thyroid cancer cell line

Background: Evaluation of cell viability is momentous in pharmacologic and oncological research. Cell viability evaluation determines cell sensitivity and consequently treatment outcome. Various methods are available to determine cell survival. Each of these methods evaluates different endpoints. Accordingly, determining the correlation between these methods is important. In this study, in order to determine the viability of human anaplastic thyroid cancer cell line, the sensitivity of MTT [3(4,5dimethylthiazol2yl)2,5diphenyltetrazolium bromide] assay, trypan blue test and clonogenic assay were compared.Methods: This experimental study was performed in the Cellular and Molecular Research Center at Guilan University of Medical Sciences, Rasht, Iran from October 2016 to March 2017. The human anaplastic thyroid cancer cell line was cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) with 10% fetal bovine serum (FBS). The cultured cells were treated with melatonin, for 24 hours. Then, the viability of the cells was evaluated by MTT assay, trypan blue test and clonogenic assay. Furthermore, plating efficiency and surviving fraction were used in order to draw survival curve in the clonogenic assay.Results: The concentration of melatonin at IC50 point was 4.794 plusmn;0.117 millimolar (mM) in MTT assay, 4.375 plusmn;0.894 mM in trypan blue test and 2.246 plusmn;0.326 mM in clonogenic assay. Comparing the IC50 values of these test revealed that C50 values obtained from MTT assay and trypan blue test had no significant difference (P=0.6446), while there was a significant difference between IC50 values obtained from MTT and clonogenic assays (P=0.0032). Moreover, the IC50 values obtained from trypan blue test and clonogenic assay were also significantly different (P=0.0078). The results of the regression analysis of cell viability were shown a linear, positive and significant correlation between these three methods and MTT assay and trypan blue test showed higher correlation (r=0.99, P<0.001).Conclusion: Based on our results, all these methods were effective to identify cytotoxicity in human anaplastic thyroid cancer cell line, while MTT assay and trypan blue test were more sensitive than clonogenic assay.