همسانه‌سازی ژن و بیان دُمین عملکردی ترومبوپویتین به‌صورت محلول با به‌کارگیری میزبان بیانی رزتاگامی

زمینه و هدف: پروتیین ترومبوپویتین یک سایتوکین مهم است که در تنظیم تکثیر سلول های بنیادی خون ساز و تمایز مگارکاریوسیت ها دخیل است. به دلیل مقدار اندک این پروتیین در خون، در بسیاری از مراکز بیوتکنولوژی این پروتیین به صورت نوترکیب تولید می شود. هدف از این مطالعه همسانه سازی و بیان ژن این پروتیین بود.روش بررسی: این مطالعه تجربی آزمایشگاهی در مرکز تحقیقات انتقال خون تهران، از مرداد 1395 تا شهریور 1396 انجام گرفته است. سلول های رده سلولی hepg2 کشت و از آن ها rna جهت الگوی سنتز cdna استخراج شد. cdna به عنوان الگوی واکنش pcr با استفاده از پرایمرهای طراحی شده قرار گرفت و توالی رمزکننده ی دُمین (domain) عملکردی ترومبوپویتین جداسازی و وارد پلاسمید pet32 شد. وکتور نوترکیب با استفاده از روش ختم زنجیره توالی یابی و سپس وکتور نوترکیب به سویه ی بیانی رزتاگامی تلقیح شد. القای بیان پروتیین با استفاده از مقادیر مناسب isopropyl β-d-1-thiogalactopyranoside (iptg) انجام گرفت. باکتری بیان کننده تهیه شده، تحت آزمون وسترن بلات قرار گرفت.یافته ها: با خوانش توالی وکتور نوترکیب، حضور توالی ژن ترومبوپویتین تایید شد. القای بیان، ارزیابی پروتیین کل سلول حاکی از بیان پروتیین هدف به صورت محلول در فضای سیتوپلاسمی بود. جایگاه قرارگیری باندهای مربوط به توالی مورد انتظار در ژل پلی آکریل آمید و واکنش انجام گرفته با آنتی بادی های آنتی هیستگ در وسترن بلات گویای درستی بیان پروتیین هدف بود.نتیجه گیری: باکتری رزتاگامی توانایی بیان پروتیین نوترکیب ترومبوپویتین را به صورت محلول دارد. با این روش می توان با استفاده از سیستم پربازده باکتریایی، پروتیین نوترکیبی تولید نمود که به صورت انکلوزیون بادی نبوده و مستلزم مراحل بازپردازی نمی باشد.