استفاده از mir-31-mimic جهت مهار متاستاز سرطان پستان در رده سلولی mda-mb231 غنی از سلول‌های بنیادی سرطانی

زمینه و هدف: mirna های مرتبط با متاستاز حوزه جدیدی از درمان های متاستاز بر اساس mir را ایجاد کرده که پتانسیل درمانی بالایی برای کشنده ترین جنبه سرطان، یعنی متاستاز دارد. mir-31 یک mirna ضد متاستازی با عملکرد پلیوتروپیک است که بیان آن در سلول های متاستاتیک سرطان پستان به طور قابل توجهی کاهش می یابد. این mirna در چندین مرحله از آبشار متاستازی نقش دارد و استفاده از روش های بازیافت mir-31 می تواند روش کارآمدی برای مهار متاستاز باشد. روش بررسی: نوع مطالعه مقطعی می باشد که در مهر سال 93-1392 در دانشگاه تربیت مدرس انجام شده است. الیگوی دورشته ای mir-31 بالغ بر اساس دستورکار تولید کننده کیت در وکتور pcdna 6.2gw/emgfp کلون شد. رده های سلولی سرطانی mda-mb231 و mcf-7 پستان کشت داده شدند. mirna آنها استخراج گردید و بیان mir-31 پیش از تیمار با سازه حاوی mir-31 در دو رده سلولی و سلول های نرمال بافت پستان تعیین شد. سپس سازه حاوی mir-31 به دو رده سلولی ترانسفکت شد. بیان mir-31 پس از 48 ساعت ارزیابی شد و آزمایش های ایجاد خراش و سنجش تهاجم جهت ارزیابی میزان مهاجرت و تهاجم انجام شد. یافته ها: نتایج real-time polymerase chain reaction (pcr) پیش از ترانسفکشن سازه حاوی mir-31 کاهش چهار و بیش از 100 برابری بیان mir-31 را به ترتیب در mcf-7 و mda-mb231 نسبت به سلول های نرمال پستان نشان داد ولی بررسی بیان پس از ترانسفکشن سازه حاوی mir به mda-mb231 نشان دهنده افزایش قابل توجه در بیان mir-31 و کاهش 20 برابری خصوصیات تهاجمی و 10 برابری خصوصیت مهاجرتی نسبت به mcf7 بود. نتیجه گیری: استفاده از mir-31 در درمان بر اساس بازیافت mir به وسیله mir-31-mimic امکان مهار کارآمد متاستاز را مطرح می کند.

Inhibition of breast cancer metastasis by using miR-31-mimic in cancer stem cell rich MDA-MB231 cell line

Background: Metastasis associated miRNA (metastamiR) opened a new field of antimetastatic therapy which have a great potential of treatment for the most lethal aspect of cancer, metastasis. The pleiotropic nature of gene regulation exhibited by certain miRNAs that showed that miRNAs might be endowed with a capacity to function as crucial modulators of tumor metastasis. MiR31 is a pleiotropic antimetastatic miRNA whose expression decreased significantly in metastatic breast cancer cells. MiR31 has multiple roles in metastasis cascade. Therefore, using the miR31restoration based therapy could be an efficient antimetastatic strategy for cancer therapy. Methods: This research was performed from May 2014 to October 2015 in Tarbiat Modares University in Tehran, Iran. The doublestrand oligo of mature miR31 was cloned into pcDNA 6.2gw/EmGFP according to the manufacturer instruction. The MDAMB231, MCF7 breast cancer cell lines were cultured and their miRNAs have been extracted. The expression of miR31 has been quantified by Real timePCR before transfection of construct contained miR31 into two cell lines and in normal breast cells. Then the constructs contain miR31 have been transfected in to two cell lines. The expression of miR31 has been quantified after 48 hours. Scratch and invasion assay have been carried out for assessing the level of migration and invasion. Results: The result of Real timePCR before transfection of constructs contained miR31 have been shown 4 fold and more than 100 fold reduction in expression of miR31 in MCF7 and MDAMB231 respectively in comparison to miR31 expression in normal breast cells, but after transfection of miR31 construct to MDAMB231 the quantification of expression showed the significant increase in mir31 expression and 20 fold reduction in invasive and 10 fold reduction in migratory characteristics of MDAMB231 in comparison to MCF7. Conclusion: Metastasis associated miRNA have been represented a promising candidates in the field of antimetastatic therapy and miR31 as a powerful member of this family can function very effectively in order to inhibit the metastasis and introduce the new possibility of metastasis inhibition.