بررسی ترکیبات شیمیایی، اثرات آنتی‌اکسیدانی، ضد باکتریایی، سیتوتوکسیک و آپوپتوزی عصاره گیاه به‌لیمو بر روی رده سلولی سرطان کولون

زمینه و هدف: گیاه به لیمو (aloysia citrodora) از نظر طب سنتی در ایران حایز اهمیت می باشد. هدف این مطالعه بررسی ترکیبات شیمیایی، اثرات آنتی اکسیدانی، ضد باکتریایی، سمیت سلولی و آپوپتوزی عصاره گیاه به لیمو بر روی رده سلولی سرطان کولون می باشد.روش بررسی: این مطالعه تجربی از فروردین تا شهریور 1394 در دانشگاه آزاد اسلامی واحد تهران شرق انجام گرفت. ترکیبات شیمیایی عصاره گیاه به لیمو با استفاده از روش gas chromatographymass spectrometry (gc-ms) آنالیز شد. اثرات آنتی اکسیدانی، ضد باکتریایی و سمیت سلولی عصاره به ترتیب از طریق روش dpph، دیسک دیفیوژن و mtt تعیین شد. مولکول rna استخراج شد و سپس cdna ساخته شد. در نهایت، بیان ژن های آپوپتوزی bax و bcl2 با روش real-time pcr ارزیابی شد و القای آپوپتوز توسط روش فلوسایتومتری مشخص شد.یافته ها: آنالیز فیتوشیمیایی عصاره، تعداد 37 ترکیب را نشان داد که بیشترین میزان مربوط به spathulenol (57/17/%) و caryophyllene oxide (15/%15) بود. همچنین، عصاره مورد مطالعه دارای mg/ml 0/03±0/6 ic50= خاصیت آنتی اکسیدانی بود. این عصاره بیشترین اثر را بر روی باکتری گرم منفی و کمترین اثر را بر روی گرم مثبت داشت. افزایش بیان ژن bax وکاهش بیان bcl2 به ترتیب به میزان 0/72 ±3/47 (p<0/05) و 0/35 ±0/43 (p<0/05) نشان دادند. همچنین، نتایج فلوسایتومتری میزان آپوپتوز 38/66درصدی را نشان داد.نتیجه گیری: به نظر می رسد که عصاره گیاه به لیمو به عنوان گیاهان بومی کشورمان پتانسیل آنتی اکسیدانتی، ضد باکتریایی و ضد سرطانی بالایی دارد و پیشنهاد می شود که مطالعات بیشتر در مورد اهمیت دارویی این گیاه انجام شود.

Evaluation of chemical composition, antioxidant, antibacterial, cytotoxic and apoptotic effects of Aloysia citrodora extract on colon cancer cell line

Background: Aloysia citrodora belongs to the Verbenaceae family of plants, a wellknown herbal medicine in Iran. The aim of the present study was to investigate the chemical composition, antioxidant, antibacterial, cytotoxic and apoptotic effect of A. citrodora extract against human colon cancer (HT29) cells by using realtime polymerase chain reaction and flowcytometry methods.Methods: This experimental study was carried out in Islamic Azad University, East Tehran Branch, from March to September of 2014. At first, the A. citrodora chemical constituents were analyzed by gas chromatographymass spectrometry (GCMS) technique. In addition, antioxidant assay, antibacterial and anticancer effect was performed using 1,1diphenyl2picrylhydrazyl (DPPH), disk diffusion and 3(4,5dimethylthiazol2yl)2,5diphenyltetrazolium bromide (MTT) methods, respectively. The half maximal inhibitory concentration (IC50) value was calculated. We extracted total RNA molecules by using RNX solution, after which cDNA was synthesized. Finally, the proapoptotic (Bax) and antiapoptotic (Bcl2) gene expression was performed by realtime polymerase chain reaction and apoptotic effects were analyzed using Flowcytometry method.Results: GCMS analysis of Aloysia citrodora extract was shown 37 major components and the most frequent component was belonged to Spathulenol (17.57%) and Caryophyllene oxide (15.15%) The antioxidant activity of the extract was IC50= 0.6 plusmn;0.03 mg/ml. The maximum and minimum antibacterial effects of extract were belonged to gramnegative and grampositive bacteria, respectively. Cytotoxic results revealed that the A.citrodora extract have IC50= 20.1 plusmn;0.78 mg/ml against colon cancer (HT29) cell line and realtime polymerase chain reaction results showed the expression level of Bax and Bcl2 was increased and decreased respectively in colon cancer cell line (3.470 plusmn;0.72 (P< 0.05), 0.43 plusmn;0.35 (P< 0.05)). In addition, the flowcytometry results indicated the 38.66% apoptosis in colon cancer cell line.Conclusion: According to the results, it seems that A. citrodora extract has potential antioxidant, antibacterial and anticancer effects and it suggested that further studies were performed for A. citrodora pharmaceutical importance.