ایجاد جهش هدفدار در ژن ifnβ به منظور افزایش پایداری mrna و سطح ترجمه آن با روش megaprimer pcr

زمینه و اهداف: پروتئین اینترفرون‌بتا (ifnβ) به عنوان یک داروی نوترکیب تولید شده و در درمان برخی بیماری‌ها مثل مالتیپل اسکلروزیس استفاده می‌شود. در سلول‌های یوکاریوتی mrna ifnβ به سرعت تجزیه می‌شود و نیمه‌عمر آن بسیار کوتاه است. یکی از عواملی که باعث این امر می‌شود وجود توالی غنی از au (are) در utr´3 این mrna می‌باشد. این ناحیه اثر مهاری بر ترجمه نیز دارد. هدف این تحقیق حذف are از ژن اینترفرون‌بتا جهت افزایش پایداریmrna و سطح ترجمه می‌باشد. مواد و روش‌ها:به منظور حذف یک توالی 18 نوکلئوتید از are از روش megaprimer pcr استفاده شد. محصول pcr با آنزیم‌های ecori و bglii برش داده شد. وکتور نیز توسط همین آنزیم‌ها اما به صورت نسبی برش داده شد. محصول برش یافته pcr خالص‌سازی شد و داخل وکتور کلون شد. در ادامه وکتور نوترکیب حاصل به رده سلولی cho ترانسفکت شدند. یافته‌ها: محصول مرحله اول واکنش pcr حاوی جهش حذفی بود و به عنوان مگاپرایمر در واکنش دوم استفاده شد. هضم نسبی وکتور، قطعاتی با وزن‌‌های مختلف ایجاد کرد. قطعه مورد نظر ما از ژل استخراج و به عنوان وکتور کلونینگ استفاده شد. محصول نهایی pcr داخل وکتور کلون شد. صحت واکنش کلونینگ تایید شد و وکتور نوترکیب حاصل، به رده سلولی cho ترانسفکت شد. نتیجه‌گیری: منطقه‌ای 18 نوکلئوتیدی از mrna ifnβ حذف شد. اثر این میکروحذف بر پایداری mrna و بازدهی ترجمه درآینده بررسی خواهد شد.