2ی انسانی در سیستم بیانی اشرشیاکلی B کلونینگ و بیان ژن اینترفرون آلفا

زمینه و هدف: اینترفرونها وسیله دفاعی بدن علیه ویروسها هستند که بهسرعت در بدن تولید شده، سلولهای اطراف را به تولید پروتیینهایی که تکثیرویروس را مهار، یا پاسخ ایمنی و رشد سلولی را کنترل میکنند، تحریک2 انسانی در ایران و جهان، b میکنند. با توجه به اهمیت دارویی اینترفرون آلفاتولید این دارو در داخل کشور و از طریق بیوشیمیایی امکانپذیر اما بسیار مشکلمیباشد. زیرا تولید این پروتیین توسط سلولهای سالم بسیار کم انجام میشود.2b و بیان ژن اینترفرون آلفا (cloning) هدف از این تحقیق، همسانهسازیانسانی در باکتری اشرشیاکلی در یک سیستم بیانی مناسب جهت امکان هدایتپروتیین تولیدشده به فضای پریپلاسمی باکتری است. بیان در پریپلاسم، فضایعالی برای تشکیل پیوندهای صحیح و پیچش صحیح ایجاد میکند. ناخالصیپروتیین و فعالیت پروتیازها در پریپلاسم کمتر از سیتوپلاسم است و تخریب وتجزیه پروتیینها در پریپلاسم کمتر اتفاق میافتد.2 پس از تکثیر با آغازگرهای اختصاصی در b روش بررسی: ژن اینترفرون آلفاو پپتید نشانه پریپلاسمی t تحت کنترل پروموتور 7 pet-26b(+) ناقل بیانیکلون گردید و به xhoi و ncoi و با استفاده از آنزیمهای برشی pelbمنتقل گردید. همسانهسازی ژن bl21(de باکتری اشرشیاکلی سویه ( 3،colony pcr با استفاده از pet-26b(+) اینترفرون آلفا در ناقل بیانیهضم آنزیمی و تعیین توالی، تایید شد. سپس بیان ژن اینترفرون آلفا با استفاده ازآنالیز بلات نقطهای در فضای پریپلاسمی و بهصورت پروتیین کل در زمانهایمورد بررسی قرار گرفت. iptg مختلف پس از القا بایافتهها: با استفاده از آنالیز بلات نقطهای تایید شد که پروتیین نوترکیب2 در سیستم بیانی اشرشیاکلی تولید و وارد فضای پریپلاسمی b اینترفرون آلفاباکتری شده است.2b نتیجهگیری: این تحقیق میتواند امکان تولید پروتیین مهم اینترفرون آلفاانسانی نوترکیب را در شکل صحیح خود و با صرف هزینههای بسیار پایینترفراهم آورد.