تهیه Cdna از Mrna ژن Od1 استخراج شده از بافت غده زهری عقرب ایرانی ادونتوبوتوس دوریه (Odonthobuthus Doriae)

زمینه و هدف: در اکثر نقاط ایران، به ویژه مناطق مرکزی، جنوب و شمال شرقی، عقرب زدگی یک مشکل بهداشتی جدی محسوب می شود. بیشتر این گزش ها، ناشی از عقرب‌های خانواده بوتیده (buthidae family) می‌باشد. زهر عقرب دارای ترکیبات فعال بیولوژیک مختلف از جمله سموم عصبی (نروتوکسین) می‌باشد که هر کدام توسط ژن مخصوص به خود کد می‌شوند. هدف از انجام این پژوهش تکثیر cdna کد کننده یک نروتوکسین شبه آلفا به نام od1 از غده زهر عقرب ایرانی ادونتوبوتوس دوریه (odonthobuthus doriae) می‌باشد.روش بررسی: نمونه های عقرب از آزمایشگاه رفرانس عقرب موسسه رازی کرج تهیه و شناسایی شدند. با استفاده از کیت استخراج rna، مجموع rna از غده زهری عقرب استخراج شد. پس از این مرحله، ساخت cdna از rna استخراجی انجام شد. به منظور تکثیر cdna کد کننده نوروتوکسین، آغازگرهای مناسب طراحی و تهیه شد. پس از بهینه سازی شرایط pcr، و با استفاده از تکنیک نسخه یرداری معکوس (rt-pcr )، قطعه cdna کد کننده سم عصبی od1 با 64 اسید آمینه تکثیر شد.یافته ها: با استفاده از کیت های استخراج و تکنیک rt-pcr، قطعه cdna از غده زهر عقرب ادونتوبوتوس دوریه تکثیر یافت. cdna به دست آمده جهت انجام کلونینگ بعدی در نظر گرفته شد. باند مورد نظر مربوط به ژن od1 با طول 195 bp بر روی ژل آگارز شناسایی شد. این باند شامل 264 base pair کد کننده سم عصبی od1 می باشد.. نتیجه گیری: ترتیب اسید آمینه قابل پیش بینی این سم شامل 88 اسید آمینه می باشد که شامل یک سیگنال پپتید با 24 اسید آمینه و سم od1 کامل با 64 اسید آمینه می باشد.