بیان و خالص سازی پروتئین rbd نوترکیب ویروس sars cov-2 در سیستم بیانی پروکاریوتی به منظور ارزیابی آنتی بادی igg موجود در سرم افراد بهبودیافته از بیماری کوید 1

زمینه و هدف یکی از مهمترین پروتئینهای ویروس 2-cov–sars پروتئین s است که از دو زیرواحد 1s و 2s تشکیل شده است. مهمترین ناحیه در زیرواحد s1 ناحیه اتصال به رسپتور ) rbd ( است که نقش کلیدی در اتصال به رسپتورهای ace راایفا میکند. rbd یک ناحیه حفاظت شده در پروتئین s است که هدف سیستم ایمنی و تولید آنتی بادی علیه ویروس است.باتوجه به اهمیت این ناحیه )در تولید آنتی بادیهای خنثی کننده( که میتواند انتخاب مناسبی جهت توسعه واکسن و تولیدکیت های تشخیص سرولوژی باشد، ازاین رو در این مطالعه، میزان واکنش آنتی بادیهای موجود در سرم بیماران بهبودیافته از بیماری کوید 19 با استفاده از پروتئین rbd نوترکیب تولید شده درسیستم بیانی پروکاریوت به عنوان یک سیستم بیانی ارزان قیمت بررسی شد.روش بررسی در این مطالعه سازه نوترکیب rbd-b22pet به میزبان باکتری اشرشیاکلی ) 21bl ( انتقال و سلولهای باکتری درمحیط کشت داده شد. سپس بیان پروتئین با استفاده از ایزوپروپیل بتادی تیوگالاکتوزید ) iptg ( القا شد. بیان پروتئین نوترکیبrbd با استفاده از ژل اکریل آمید ) sds-page ( و وسترن بلات به تایید نهایی رسید. درپایان پروتئین موردنظر با استفادهازستون نیکل استخراج و در یک سنجش الیزای غیرمستقیم استفاده شد.یافته ها در مقایسه با سرم افراد سالم ) 0.412cut off: ( افزایش معنی داری در میزان جذب نوری 30 نمونه سرمی به پروتئینrbd نوترکیب مشاهده نشد.نتیجه گیری پروتئین نوترکیب rbd تولیدشده در میزبان پروکاریوتی واکنش قابل توجهی به آنتی بادیهای موجود در سرم بیماران بهبودیافته از خود نشان نمیدهد و نمیتوان جهت اهداف تشخیصی از آن استفاده کرد.

expression and purification of sars cov-2 rbd protein in theprokaryotic expression system to evaluate the igg antibody in theserums of covid-19 recovered cases

background and objectives one of the most important proteins of the sars-cov-2 virus is s protein, which consists of s1 and s2 subunits. the most important region insubunit s1 is the receptor binding region (rbd), which plays a key role in binding toace receptors. the rbd is a conserved region in s protein that is the target of theimmune system and the production of antibodies against the virus. due to theimportance of this region in the production of neutralizing antibodies, it can be a goodcandidate for vaccine development and production of diagnostic kits. therefore, thepresent study aimed to assess the response rate of antibodies in the serum ofrecovered covid-19 cases using recombinant rbd protein produced in the prokaryoticexpression system as an inexpensive expression system.subjects and methods in this study, the recombinant pet22b-rbd construct wastransformed to the escherichia coli (bl21) host, and the bacterial cells were culturedin a culture medium; thereafter, protein expression was induced using isopropyl beta-d-thiogalactoside (iptg). the expression of recombinant rbd protein was confirmedby acrylamide gel (sds-page) and western blotting. finally, the desired protein wasextracted using a ni-nta column and applied in an indirect elisa.results in comparison with the serum of healthy individuals (cut off: 0.412), nosignificant increase was observed in the response of 30 serum samples to therecombinant rbd protein.conclusion the recombinant rbd protein produced in the prokaryotic host did notrespond significantly to the antibodies in the serum of recovered covid-19 patientsand cannot be used for diagnostic purposes.