بررسی القای فنوتیپ عصبی در سلول‌های بنیادی p19 تحت اثر عصاره مغز نوزاد رت و دپرنیل

زمینه و هدف: بیماری پارکینسون با از دست رفتن انتخابی گروهی از سلول‌های دوپامینرژیک در جسم سیاه ایجاد می‌شود. یکی از روش‌های درمانی این بیماری، جایگزینی سلول‌های از دست رفته توسط سلول‌های بنیادی است. این مطالعه با هدف تاثیر القاکننده های عصاره مغز نوزاد رت و دپرنیل در تمایز سلول‌های کارسینومای جنینی p19به سلول های عصبی انجام گرفت. روش بررسی: سلول‌های بنیادی p19 در محیط کشت αmem همراه با سرم 10% fbs و پس از آن سلول‌ها بر روی ظروف کشت با چسبندگی پایین جهت تولید اجسام شبه‌جنینی کشت داده شدند. جهت تمایز، سلول‌های شبهجنینی در محیط کشت حاوی سرم 3% fbs به همراه عصاره مغز نوزاد رت، دپرنیل و ترکیبی از هر دو به مدت 28 روز کشت داده شدند. برای ردیابی پروتئین‌های ویژه سلول‌های عصبی مانند سیناپتوفیزین، بتاتوبولین3 و نستین در سلول‌های تمایزیافته از روش ایمنوفلورسنس و به منظور سنجش بیان ژن‌های اختصاصی عصبی از realtime pcr استفاده شد. یافته ها: در روش ایمنوفلورسنس سلول‌های p19 تمایز یافته با هرسه گروه القاگر نسبت به آنتی‌باد‌های نستین، سیناپتوفیزین و بتاتوبولین3 پاسخ مثبت نشان دادند. بررسی بیان نسبی فاکتورهای رونویسی نستین، سیناپتوفیزین در سلول‌های تمایزیافته با هرسه القاگر با استفاده از روش realtime pcr حاکی از بیان بالای هر دوی این ژن ها تحت تاثیر هر سه گروه القاگر در هفته دوم بود و در هفته های سوم و چهارم کاهش معنی داری را نشان داد. نتیجه گیری: سلول‌های بنیادی کارسینومای جنینی p19 تحت شرایط آزمایشگاهی و تحت تاثیر عوامل القاگر قابلیت تمایز به سلول‌های عصبی به ویژه فنوتیپ دوپامینرژیک را دارند.

Investigation of Neuronal Phenotype Injection in P19 Stem Cells Under the Influence of Rat Infant Extract and Deprenil

Introduction: Parkinson’s disease cause by selective loss of a group of dopaminergic cells in the Substantial nigra. One of the treatments for this disease is the displacement of lost cells by stem cells. The purpose of this study was to investigate the effect of inducers of extract of neonatal rat brain and deprenyl on neural differentiation of P19 embryonic carcinoma cells. Materials and Methods: P19 stem cells were cultured in alphaMEM medium supplemented with 10% FBS serum. Then, the cells were cultured on lowadhesion culture plates to create pseudoembryonic bodies. In order to differentiate, germ cells were cultured in medium containing 3% FBS serum and extract of neonatal rat brain, deprenyl and mixture of both extract for 28 days. Immunofluorescence assay and Realtime PCR was applied to detect and evaluate the expression specific proteins of neurons including synaptophysin, betatubulin 3 and nestin, respectively. Results: Regarding to immunofluorescence results, differentiated P19 cells, positively affected by three inducers such as nestin, synaptophysin and beta3. Relative expression of transcription factors of nestin, synaptophysin in cells differentiated by all three inducer using Realtime PCR demonstrated that in P19 embryonic carcinoma cells, Nestin and Synaptophysin expression increased in the second week, while, thier expression significantly reduced in the third and fourth weeks. Conclusion: The results of this study indicated P19 embryonic carcinoma stem cells are potential to differentiate into neurons, especially dopaminergic phenotype, following laboratory conditions and inducing factors